ELISA2准备ELISA实验的正确步骤.docx

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1、E1ISA实验的事前准备工作确定有进行E1ISA实验最重要的仪曙：酶标仪确定实验动物种属和E1ISA检测指标：*查找文献，根据临床意义，确定要用的实验动物种属（如大鼠、小鼠、豚鼠、兔、猪、狗等）和用E1ISA方法检测的实验指标（如白介素，生长因子，激素等）；确定要搜集的标本类型：*确定要搜集的标本类型，如血清、抗凝血浆、肺泡灌洗液、脑脊液、尿液、关节华液、组织匀浆、细胞培养上清液等：确定要收集的标本数量；确定标本的处理方法：*合理分组，根据实验模型，确定要收集的标本数量：确定购买试剂盒的厂家和试剂盒类别*根据标本数量，确定要购买的试剂盒的规格和数量：确认适用于要检测的标本的相应规格的E11SA

2、试剂盒的灵敏度、检测范围、价格和到货期等情况：了解试剂盒的整盒有效期和拆开包装接的有效期（各主要成分的开瓶有效期）；* 复孔：为了增加结果的可靠性，对标准曲线和标本，要求做双复孔或者三复孔，就是同一份标本，平行做两次或者三次。如果本身试剂盒的稔定性好，而又不要求每个数据的绝时准确，主要目的是为了统计学意义的话，可以选择做双复孔或者是单孔。确定时间的合理安排* 确定标本的采集时间：根据采集时间来安排标本的保存条件、何时进行试剂盒的购买、如何进行预实验的安排、如何进行大批量标本的检测：* 如果标本采集时间过长，如超过六个月，请把标本放在70度或者液氮罐中保存；在基本上收集完标本的前一个月，进行试剂

3、订购。一般国外试剂的到货期最长一个月，有足够的时间来等待试剂盒的来到。到货彳爰，取几个样品（最少两个，估计的低值和高值）和标准品来进行预实验。预实验成功彳爰才能进行大批量标本的实验。* 因为每个试剂盒可能都经过长途运输，运输途中可能会导致试剂盒失效，所以预实验是必不可少的，这样才能保证试剂盒没有问题，而且一旦有问题可以快速得到解决，且不用浪费自己辛苦收集的标本。E1ISA实验的事前准备工作二*样品合理采集和保存；具体请参照：E11SA实验标本的采集、处理和保存*试剂盒购买；确认有以下仪器和材料：E1ISA实验需要但试剂盒中未提供的材料1 .可在试剂盒要求得波长处进行读数的醉标仪：2 .水浴箱或

4、者是恒温箱（空气浴）：3 .能精确吸取10-2001的移液器；4 .可调多道（8）移液器（50-2001）；5 .供可调多道移液器使用的试剂存放槽；6 .洗瓶或洗板机；7 .蒸饱水或去离子水；8 .1升的圆柱形量筒：9 .移液器：1和（10或25m1）；10 .移液器枪头；I1纸巾；12 .计时器，用以监控温育步骤；13 .处理池和消毒剂（例如：0.5%次氯酸钠，10%家用漂白水）；其中需要注意的是：* 在实验进行前，需要确认酶标仪在恰当波长能够正常读数，且能正常打印：* 用一支温度计来测量使用的温育设备（水浴箱或者是恒温箱），温控是否精确；因为随着仪器的老化,上面的控温不一定准确，所以需要测

5、量一下实际温度。* 对移液器，也就是加样器进行校正；确保加样准确。E11SA实验的进行（预实验）：*仔细阅读试剂盒的说明书和注意事项：* 参照E11SA和影响E11SA实验效果常见问题原因分析及解决办法，详细明确各个实验步骤。* 这一阶段对加样要求不高，主要是熟悉整个操作，验证试剂盒，明确标本是否可以检测出来。* 相信做过一次预实验以接，即使是从来没有做过E11SA实验的人，也会信心大增的。* 根据预实验反馈的几种结果来确定是进入下步：大批量实验，还是重新进行预实验。只有预实验结果是好的，成功的时候，才能进入下一步。预实验反馈的几种结果：* 预实验结果：定量检测中，如果标准曲线正常，标本值落在

6、最高点和最低点之间，则认为预实验结果是好的，成功的。* 不好的预实验结果：1定量检测中，标准品如果不显色，清查看自己的操作是否有问题；若非操作问题，则有可能是标准品失效，请与厂家联系，是再做一次，还是返回厂家由厂家来解决：2.定量检测中，标准品正常显色，但标本没有显色；这时有两种情况：（1）标本中某些指标含量很低，会出现这种情况；可以通过修改某些操作步骤来达到提高灵敏度；或者通过超滤的方法来浓缩标本，可以使标本能检测出；也可以通过更换更灵敏的试剂盒来达到这个目的。（2）动物品系问题导致，要检测的指标与试剂盒中包被的抗体不同，可能会导致检测不出。E11SA实验的进行（大批量标本的实验）*与预实验不同的是，正式实验增加了对加样的要求，要求加样迅速、准确。*参考影响E11SA实验效果常见问题原因分析及解决办法之加样。