备课素材:差速离心法和密度梯度离心法.docx
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1、差速离心法和密度梯度离心法人教2019版高中生物学必修一P47介绍了“差速离心法”,必修二P54简单介绍了“密度梯度离心”:龄科学方法分离细胞器的方法-酣离心法是途离心主委是采取逐渐提岛篇心迷隼分离不同大小黑粒的方法如在分离储胞中的佃Its时,将如地膜破坏后.再成由各片细胞器和细胞中其他物质蛆成的匀菜.将匀浆放入离7管中.采取逐麻提商离心速率的方法分离不同大小的外电K起柢的离心速拿校低.让校大的顿&沉降到管底,小的曦也仍M悬浮在上潦液中收集沉淀,改用较高的离心速率离心J1清液,将收小的腰板沉降,以此臭检.达则分离不同大小旗校的目的。思考讨论证明DNA半保留复制的实验背景知识15N和“N是N无索
2、的两种稳定同位素.这两佻同小索的相对匣子质址不同,含味的DNA11禽“N的DNA密度大,因此利用疥心技术可以在试管中M:分含有不同N元素的DNA实验过程科学家先用含为NNH1的培踩液培界大肠杆菌.让大肠杆曲繁殖若干代.这时.大肠杆菌的DNA几乎都是5N标记的然后,将大曲杆曲转移到含石MNHQ的普通培养液中在不同时刻收集大肠杆菌并提取DNA.M杼提取的DNA进行离心.记玳离心后试管中DNA的位置实聆预期假设DNA是华保制蜕制,离心后试管中DNA的位置会是怎样的呢?这就需要运用演纬推理来函测那么,二者有什么不同?1、差速离心法(又称分步离心法)采用不同的离心速度和离心时间,使沉降速度不同的颗粒分步
3、离心的方法,称为差速离心。操作时,将含有两种不同颗粒的混悬液,以常速离心,使大的颗粒下沉,将上清液倾倒于另一离心管中,再加大离心力,离心一定时间,分离小的颗粒,反复多次分离,达到分离目的。差速离心主要用于分离大小和密度差异较大的颗粒。差速离心法的优点是:操作简单,离心后用倾倒法即可将上清液与沉淀分开,并可使用容量较大的角式转子;分离时间短、重复性高;样品处理量大。缺点是:分辨率有限、分离效果差,沉淀系数在同一个数量级内的各种粒子不容易分开,不能一次得到纯颗粒;壁效应严重,特别是当颗粒很大或浓度很高时,在离心管一侧会出现沉淀;颗粒被挤压,离心力过大、离心时间过长会使颗粒变形、聚集而失活。2、密度
4、梯度离心法(又称区带离心法)该法又分为速率区带离心法和等密度区带离心法。样品在一定惰性梯度介质中进行离心沉淀或沉降平衡,在一定离心力下把颗粒分配到梯度液中某些特定位置上,形成不同区带的分离方法。该法的优点是:具有很好而分辨率,分离效果好,可一次获得较纯颗粒;适用范围广,既能分离沉淀系数差的颗粒,又能分离有一定浮力密度的颗粒;颗粒不会积压变形,能保持颗粒活性,并防止已形成的区带由于对流而引起混合。缺点是:离心时间较长;需要制备梯度液;操作严格,不宜掌握。速率区带离心法:是根据分离的粒子在离心力作用下,在梯度液中沉降速度的不同,离心后具有不同沉降速度的粒子处于不同的密度梯度层内形成几条分开的样品区
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