杂交瘤细胞生产抗体技术细胞筛选.docx
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1、杂交瘤细胞生产抗体技术细胞筛选杂交瘤细胞在融合后2周左右即可筛选,即把分泌所需抗体的杂交瘤孔从众多的孔中选出来,通常也称为抗体检测。抗体检测的方法许多,通常依据所讨论的抗原和试验室的条件而定。但作为杂交瘤筛选的抗体检测方法必需具有快速、预备、简便,便于一次处理大量样品等特点。由于往往有几百个样品需要在短短几个小时就报告结果,以便打算杂交瘤细胞的取舍。所以选用抗体检测方法的原则是快速、敏感、特异、牢靠、花费小和节约人力。一般说来,在融合之前就必需建立好抗体检测方法,并克服可能存在的问题。另一个重要问题是抗体检测方法所需要的“动力学范围”,即检出背景以上的最强与最弱信号之比,依所用的检测抗原是否纯
2、洁而定。如杂交瘤抗体是针对纯化的蛋白质抗原的,100%的抗原参加反应,一个阳性/阴性判别系统就够了。另一方面,假如杂交瘤抗体是针对细胞表面微量的蛋白抗原,检测系统可能需要能测出微弱信号,则动力学范围至少应为10:1,最好为100:I。此外,检测方法的选择还受所需杂交瘤抗体的类型和预定的用途的影响。结合补体的抗体可以用基于细胞毒性反应的检测方法来选出。如需结合A蛋白的杂交瘤抗体,就要用结合蛋白A的检测方法。杂交瘤细胞的冻存与复苏(1) 杂交瘤细胞的冻存在建立杂交瘤细胞的过程中,有时一次融合产生许多“阳性”孔,来不及对全部的杂交瘤细胞作进一步的工作,需要把其中一部分细胞冻存起来;另一方面,为了防止
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