石墨炉原子吸收法测定全血中硒.docx

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1、石墨炉原子吸收法测定全血中硒叶立和蔡小璇广东省东莞市职业病防治中心广东东莞523008摘要：目的建立直接测定全血、尿中硒的方法。方法通过选用最佳仪器条件，用同一种基体改进剂对全血样、尿样510倍稀释后，采用石墨炉原子吸收光谱法直接进样测定。结果测定0-80.0ug/1浓度范围内的标准系列溶液，线性关系良好，相关系数Y为0.9993以上：全血硒特征质量分别为9.4pg：进样量10同时，全血硒的检测限为2.7g1;相对标准偏差为17%4.3器样品加标回收率98.8%103.9%,方法精密度和准确度均符合痕量分析的要求。结论该法简便快速、灵敏准确，是测定全血、尿中硒的理想方法。关键词：全血；硒；石墨

2、炉；原子吸收光谱法硒是人体不可缺少的微量元素，是组织和红细胞中谷胱甘肽过氧化酶等酶的重要组成部分。缺少硒，可导致这些酶的活性下降，机体抗氧化能力和抗癌能力下降。硒又是有毒元素，当机体接触高剂量的硒化物时，可造成健康危害。硒能替代许多含硫酶和氨基酸中的硫，使之变性，引起硒中毒。硒进入人体后，先在血浆中，然后进入红细胞中，因此测定血硒能反映硒接触状态，可作为生物监测指标I1目前血硒的测定还没有成熟的检测方法。本文对石墨炉原子吸收法测定血中硒的方法进行了研究，该方法操作简便，由于血样是一种基体成份比较复杂的生物材料，硒又是易升华元素，灰化温度不易控制，灰化温度太低，血样基体成分去除不掉，严重干扰测定

3、，温度太高，硒易升华损失，准确度难以保证。我们研究了在血样中加入合适的基体改进剂，在保证硒元素不损失的前提下大大提高了灰化温度，消除了基体干扰，方法灵敏、准确，预处理简单快捷，可用于血硒检测。1材料和方法1.1原理血样经基体改进剂稀释后，直接注入石墨炉原子化器，所含的各种形态硒在石墨管内高温原子化为基态的硒，硒的基态原子吸收来自硒空心阴极灯发出的共振线，其吸收强度在一定范围内与硒浓度成正比。1.2仪器与试剂1.1.1 仪器THERMoSo11ARM6火焰/石墨炉原子吸收光谱仪，GF95石墨炉，FS95自动进样器，长寿命（E1C）石墨管（THERMO）,硒空心阴极灯（THERMO）。1.1.2

4、试剂实验用水为去离子水，除特定注明外，所用试剂均为优级纯；硝酸；TritonX-100；氯化把（分析纯）；硒标准储备液（IOOmg1）,由国家标准物质研究中心提供；硒标准使用液（IOO.00ug/1）：准确吸取一定量的硒标准储备液，用1%（体积分数）的硝酸溶液逐级稀释，最后稀释为100.0ug1的硒标准使用液。1.3 采样、运输和保存采集静脉血，用肝素钠抗凝管采血，充分摇匀。常温下尽快运输至实验室，置4冰箱中保存，可保存3周。1.4 实验方法1.4.1 样品处理以0.0125%PdQ21%TritOnX-100/0.1%HNo3混合液为基体改进剂，对血样进行10倍稀释后（通常在样品杯中加入09

5、m1基体改进剂，再加入0.1m1血样混匀）直接进样。1.4.2 仪器工作条件波长196.0nm;灯电流80%（12mA）；通带0.5nm；背景校正方式为塞曼；测定方法为标准曲线：线性最小二乘法拟合；定量方式为峰高；进样体积IOU1；石墨管类型：E1Co石墨炉升温程序见表1：表1石墨炉升温程序阶段温度（C）时间（S）斜坡（Cs）气体流量（1min）命令干燥10030.0100.2灰化110020.01500.2原子化22003.00关RDTC清除25003.000.2TC注：RD为读数，TC为光学温度控制1.4.3 标准曲线的制作在主标准样品杯中加入ImI硒标准应用液，以肝素钠抗凝管加2m1蒸锵

6、水为空白，编制标准加入法程序，以第1号样品为加标样，分别加标10、20、40、80g1（HI1样稀释后浓度计算），绘制标准曲线。1.4.4测定测定加标系列并绘制标准曲线后，自动测定其它样品。2结果与讨论2.1 仪器最佳测定条件的选择硒的灰化和原子化温度的控制是保证测量准确度的关键。利用该原子吸收光谱仪的灰化原子化自动参数自动优化程序，对灰化温度600130（TC、原子化温度190025O（TC进行自动优化测量，仪器选定的最佳灰化温度为U（XrC,最佳原子化温度为2200。2.2 线性范围和灵敏度按本方法给定条件，测定0.080.001g1（血样稀释后浓度）浓度范围内的加标系列溶液，线性关系良好

7、,相关系数丫为0.9993。石墨炉原子吸收分析的灵敏度用特征质量来表示，定为能产生1%吸收（吸光度0.0044）时所对应的元素质量，本方法的特征质量为9.4pg。按本方法测定空白全血样和尿样各11次，根据国际理论和化学联合会（IUPAC）的规定，其吸光度信号的标准偏差的3倍对应的浓度即为检测限，全血样硒的检测限为2.7g1,2.3 方法准确度和精密度取稀释血样分别加标200g1和400g1硒标准溶液，然后按表2的条件测定其硒含量，计算测定的精密度和回收率，结果见表2。采用本法经6次测定血硒样品及加标试验溶液，其相对标准偏差分别为43%、4.0%1.7%,加标回收率分别为103.9%、98.8%

8、。表2样品加标回收试验加标量（ug1）测定次数平均值（g1）CV(%)回收率（）0（血样）6201.14.32006416.74.0103.94006593.91.798.82.4质量控制应用本法对冻干牛血硒成分分析标准物质进行了测定，分别进行了6次测定，结果见表3。其测定结果在真值的质控范围内，符合率为100%o其结果与真值相差分别为0.1%和1.7%,6次测定的RSD分别为4.3%和1.7%。结果显示，本法测定的准确度和精密度均符合生物材料中有害物质测定规范的要求。表3冻干人血清质控样中硒的测定结果(UgZ1)样品编号真值(x+s)测定值(xs)CV(%)RSD(%)GBW0914199.06.999.8+2.00.84.6GBW09I4298142962.4201.92.12.5样品测定结果经对多份正常人尿样、全血样和某化工厂硒接触职工全血样进行分析测定，正常人全血硒结果为110.62-281.26g1,接触职工全血硒结果为184.6458662ug1.参考文献：11线引林.生物材料中有毒物质分析方法手册M.北京：人民卫生出版社，1994.180-181.2徐伯洪闫慧芳.工作场所有害物质监测方法M.北京：中国人民公安大学出版社，2003.346-349.