专利技术交底书-药物活性检测交底书范本.docx

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1、专利申请技术交底书交底书名称必需填写技术联系人姓名及其电话、emaiI必需填写经办人姓名及其电话、emaiI必需填写如不填写，则默认技术联系人为负责人备注1、是否仅用于申请政府高新资质或政府项目事项2、是否将来申请国外专利一份好的技术交底书有助于代理人撰写高质量的专利申请文件,从而获得更好的授权前景和爱护范围。意事项L技术联系人应为深化了解本申请技术方案的技术人员，如交底书撰写人，负责向专利审核人员和代理人解释技术细节、修改交底书、审核申请文件等工作,请务必填写技术联系人的姓名、E-mail、手机。2 .经办人应为管理本案学问产权的人，例如指示本案的申请人是谁，本案的创造人是谁，是否申请费用减

2、缓，确认本案是否可以提交等。请务必填写经办人的姓名、E-mail、手机。3 .专利申请不要求已具体实现或实施，形成完整的技术方案即可提交申请，特殊是需要向合作方公开、向标准提案或以其他方式公开的重要技术构思应在公开前尽早申请。一、与本专利最接近的现有技术:1、现有技术的方案简述（只需要描述与本专利相关的内容）：要求供应现有技术的技术方案图，针对图示做具体的文字说明，以使代理人了解本创造（有用新型）的技术背景。药物的研制过程中，生物学活性检测方法是药物筛选以及质量掌握的重要评价参数，该方法必需通过方法验证，满意专属性、精密度、精确度等方法验证方面的要求,这样才能保证生物学活性检测结果的牢靠性，才

3、能用于指导药物的筛选以及质量掌握。目前常用的针对EGFR靶向治疗药物的生物学活性测定方法，是依据药物对细胞具有增殖抑制作用的原理进行试验设计的，使用的细胞系主要是DiFi细胞和MDA-MB-468细胞，从文献报道来看，该增值卬制的细胞学活性方法并未得到公认或标准化，如DiFi细胞尚无公认的标准化细胞株，不能通过ATCC或者中国细胞保藏中心的细胞库进行购买并建库,MDA-MA-468细胞对于药物的灵敏度要欠缺一些，如文献报道，对于一些高亲和力的抗EGFR单克隆抗体，药物最高使用浓度要达到50-200ugml,显色方式和显色条件也各不相同。更重要的是，在已经报道的针对EGFR靶向治疗药物的生物学活

4、性检测方法中，缺乏对检测体系专属性、精密度、精确度等方面的方法验证与评价，难以确保检测结果的精确性与牢靠性。二、本专利的技术：（1）具体方案（描述的重点：与现有技术对比，本专利的差别以及如何通过这些差别实现客观改进效果）。假如是计算机软件创造，请附上反映方案流程的流程图。假如是产品，请附上计算机绘图（应是线条描绘）以反映产品的各个部件。请协作附图来描述各部件的连接关系（可结合附图中的数字标记描述），各步骤次序。应具体到图中有标号的每个部件和每个步骤都要描述到。上述技术方案，不能只做功能介绍，而应说明是怎样实现的？技术方案的阐述以本事域技术人员不需付出制造性劳动即可实现为准。有用新型必需供应结构

5、图，图上需标记部件名称，同时结合图进行文字说明(工艺步骤、结构说明、原理说明、动作关系说明)。创造专利必要时供应图，图的文字说明同有用新型。本创造的创造人针对现有EGFR靶向治疗药物的生物学活性测定方法存在的问题与不足，讨论了一种能够简便、精确、高效地评价EGFR靶向治疗药物的生物学活性检测方法，该方法能够满意方法验证过程中对专属性、精确度、精密度(包括重复性、日间差、人员操作误差)等方面的要求，该方法对于EGFR靶向治疗药物的讨论开发，质量掌握乃至临床应用都具有重要的意义。本创造公开了一种评价EGFR靶向治疗药物的生物学活性检测方法，包括下列步骤：(1)细胞铺板：取对数生长期高表达EGFR的

6、细胞制成细胞悬液，分别加入细胞培育板孔中，然后将细胞培育板置于培育箱中培育，使细胞贴壁；(2)参考品及供试品稀释：取参考品及供试品，依据标示浓度，先预稀释至肯定浓度，再进行系列梯度稀释；(3)加样：将步骤(2)稀释好的系列梯度浓度的参考品及供试品依次加入步骤(1)中的细胞培育板孔中，然后将细胞培育板置于培育箱中培育；(4)显色：采纳检测活细胞或死细胞量的检测体系对细胞培育板进行显色反应；(5)测定分析：步骤4显色反应完成后，取出细胞培育板混匀，放入酶标仪，对显色反应结果进行测定，并依据测定结果计算供试品的细胞增殖抑制生物学活性。(2)技术效果给出本创造(有用新型)与现有技术相比存在的优点、所产

7、生的效果，此处需要结合技术方案来描述，以推理方式说明，做到有理有据，切忌只下结论，而无分析。本创造采纳的体外细胞增殖抑制法评价EGFR靶向治疗药物的生物学活性，该方法专属性好，特异性强，精确度高，测定范围达到50150%；精密度高，重复性、日间差以及人员操作误差RSD均小于20%,参考品和供试品的4参数拟合曲线的拟合常数R2均大于0.95o因此，采纳本创造供应的方法能够简便，精确，高效地评价EGFR靶向治疗药物的生物学活性，这对于EGFR靶向治疗药物的讨论开发，质量掌握乃至临床应用都具有重要的意义。三、试验数据下列实施例涉及到的材料和试剂，试验条件和方法如下：一、材料和试剂材料：EGFR靶向治

8、疗单克隆抗体药物参考品（上海抗体药物我国工程讨论中心有限公司供应），EGFR靶向治疗单克隆抗体药物供试品（上海抗体药物我国工程讨论中心有限公司供应）。试剂：染色液CCK-8（购于Dojindo）,RPMI1640培育基粉末（购于GIBC0）,链霉素/青霉素双抗（购于GIBC0）,胰蛋白酶（购于GIBC0）,FBS（购于GIBC0）。细胞株：A-431细胞株（购于ATCC）,MDA-MB-468细胞株（购于ATCC）。二、检测方法步骤1、细胞铺板：取对数生长期高表达EGFR的细胞经胰蛋白酶消化后制成细胞悬液，计数，细胞活率应不低于85%,调整细胞密度至（3-8）又104个mL,以100U1/孔加

9、入96孔细胞培育板中，然后将细胞培育板置于37t,5%二氧化碳培育箱中培育过夜，使细胞贴壁。2、参考品及供试品稀释：取参考品及供试品，预稀释至0.5-20ugmL,再做系列梯度稀释，得到7T1个稀释度。3、加样：将稀释好的系列梯度浓度的参考品及供试品以100口1/孔依次加入上述的细胞培育板中，然后将细胞培育板放置于37C,5%二氧化碳培育箱中培育68-74小时。4、显色：采纳CCK-8进行显色，10-20ul孔。5、读数：显色反应完成后，取出细胞培育板混匀，放入酶标仪，对显色反应结果进行测定，纪录测定结果。6、结果分析：用参考品孔和供试品孔测定值与加样浓度的量效关系进行4参数曲线拟合，确定参考

10、品与供试品的EC50值，曲线拟合常数R20依据下列公式计算供试品的细胞增殖抑制生物学活性。供试品生物学活性(%)=oo%参考品参50值供试品EQ值实施例1细胞增殖抑制法评价EGFR靶向治疗药物的生物学活性以参考品和供试品为材料，采纳上述检测方法检测考察供试品相对参考品的生物学活性。试验结果如图1所示，参考品及供试品4参数曲线拟合状况良好，曲线拟合常数R2均满意0.95,复孔检测0D值的CV%1O%依据上述公式计算供试品生物学活性，以参考品作为对比，供试品的生物学活性为105%。实施例2细胞增殖抑制法评价EGFR靶向治疗药物的生物学活性分析方法的方法验证(1)专属性：EGFR靶向治疗单克隆抗体药

11、物参考品和供试品为人IgGl亚型类型免疫球蛋白，使用同属人IgGl亚型类型免疫球蛋白(购于SIGMA)作为阴性对比，依据上述试验方法进行检测。接受标准：阴性对比应与A-431细胞几乎无交叉反应，不呈现与参考品相像的型反应曲线。试验结果如图2所示，阴性对比人IgGl亚型类型免疫球蛋白与A-431细胞无交叉反应，不呈现与EGFR靶向治疗单克隆抗体药物参考品相像的反应曲线,说明本创造方法专属性良好，能够特异性的评价HER2靶向治疗药物的生物学活性。(2)精密度(重复性)：同一个试验中，由同一名试验人员对同一供试品依据上述试验方法分别在不同的细胞板中进行，试验至少重复6次，考察方法的重复性。接受标准：

12、以参考品作为参比，供试品生物学活性重复试验6次检测结果的RSD20%o试验结果如表1所示，同一名试验人员分别独立重复试验6次检测结果的RSDW5%,满意方法重复性的验证要求。表1.针对EGFR靶向治疗单克隆抗体药物生物学活性检测方法重复性验证结果汇总表第一次96%99%5%第二次100%第三次102%第四次105%第五次92%第六次98%（3）中间精密度（日间差）：由同一名试验人员在3个不同的工作日内，依据上述试验方法分别进行供试品生物学活性检测，考察方法的日间差。接受标准：以参考品作为参比，供试品3次生物学活性检测结果的RSD20%o试验结果如表2所示，同一名试验人员分别在3个不同的工作日进

13、行供试品生物学活性检测，供试品生物学活性检测结果的RSDW4%,满意中间精密度（日间差）的验证要求。表2.针对EGFR靶向治疗单克隆抗体药物生物学活性检测方法中间精密度（日间差）验证结果汇总表不同时间检测结果均值RSDDay1103%102%4%Day2105%Day398%（4）中间精密度（人员误差）：同一个供试品由3名的试验人员分别进行独立试验1次，考察方法的人员误差影响。接受标准：以参考品作为参比，供试品3次生物学活性检测结果的RSD20%o试验结果如表3所示，同一个供试品由3名试验人员进行生物学活性检测,供试品生物学活性检测结果的RSDW10%,满意中间精密度（人员误差）的验证要求。表

14、3,针对EGFR靶向治疗单克隆抗体药物生物学活性检测方法中间精密度（人员误差）验证结果汇总表不同实验人检测结果均值RSDAnalyst192%103%10%Analyst2108%Analyst3110%（5）精确度：以参考品作为材料，分别制成效价水平为50%,75%,100%,125%,150%的供试品溶液，由3名试验人员分别对5个供试品进行生物学活性检测，考察方法的精确性。接受标准：每个效价水平3次独立试验结果的RSD20%,理论值和检测值的相对误差W30%。试验结果如表4所示，同一个效价水平的供试品由3名的试验人员分别进行生物学活性检测结果的RSD均20%,5个效价水平的供试品生物学活性检测结果的理论值和检测值的相对误差在2%8%范围内，远小于理论值和检测值的相对误差W30%的接受标准，说明本创造方法满意精确度的验证要求。表4.针对IIER2靶位单克隆抗体药物细胞增殖抑制生物活性检测精确度评价结果汇总表样品名称不同实验人员检测结果均值相对误差RSD50%活性供试品Analyst148%54%8%11%Analyst255%Analyst360%75%活性供试品Analyst183%74%2%12%Analyst265%Analyst373%100%活性供试品Analyst196%105%5%8%Analyst2112%Analyst3108%