输血科作业指导书.docx

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1、文件编码目录文件名页码SXK-WHCDQRMYY-S0P-1-001SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-002SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-003目录ABO血型鉴定RH血型鉴定1212市XX区人民医院输血科工作制度文件编号SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-001页 号第1页共1页版本/修改次数第3版第0次修改输血科作业指导书审核人XX批准人XX目录发布日期20XX年04月20日SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-004SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-005SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-006凝聚胺(polybrene)试验18交叉配血试验21不规则抗体

2、筛检和鉴定试验27市XX区人民医院输血科工作制度文件编号SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-002页 号第2页共10页版本/修改次数第3版第0次修改ABO血型鉴定审核人XX批准人XX发布日期20XX年04月20日ABO血型鉴定一、AOB血型鉴定【原理】根据红细胞膜表面有无A抗原和（或）B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及。型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是指用标准抗A抗原或（和）B抗原；所谓反定型，是指用标准A细胞和B型细胞来测定血清中有无相应的抗A和（或）抗B。【试剂】1、抗A （B型血）、抗B （A型血）及抗A+B （0型血）分型血清,可购自

3、有合格证的商品。2、5%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见附件。3、受检者血清。4、受检故里5%红细胞盐水悬液。【操作】1、试管法（1）取洁净小试管（10mm60mm） 3支，分别标明抗A、抗B和抗AB,分别滴加抗A、抗B和抗AB分型血清各1滴于试管底部市XX区人民医院输血科工作制度文件编号SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-002页 号第3页共10页版本/修改次数第3版第0次修改ABO血型鉴定审核人XX批准人XX发布日期20XX年04月20日再用滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混匀。(2)另取洁净小试管(10mm60mm) 3支，分别标明A、B和O分别滴加A、B和O细胞

4、，用滴管分别辐入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和。型5%试剂红细胞悬液1滴，混匀。(3)立即以 1000rmin 离心 1 min。(4)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集或溶血现象，如肉眼未见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜观察。(5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有且于A、B亚型、类B或cisAB的发现。(6)凝集强度判断标准4+：红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3+：细胞凝集成数小块，血清尚清晰。2+：红细胞凝块分散成许多小块，周围可见到游离红细胞。1 + ：肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。：镜下可见数个红细胞凝集

5、在一起，周围有很多游离红细胞。MF：即混合凝集外观(mixed field),是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多灵敏红细胞仍呈分散分布。1、 阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。市XX区人民医院输血科工作制度文件编号SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-002页 号第4页共10页版本/修改次数第3版第0次修改ABO血型鉴定审核人XX批准人XX发布日期20XX年04月20日2、玻片法（1）取清洁玻片1张（或白瓷板1块），用蜡笔划成方格，标明抗A、抗B和抗A+B,分别用滴管滴加抗A、抗B和抗A+B分型血清1滴相应的方格内，再各加受检者2%红细胞悬液1滴，混匀。（2）另取洁净玻片1张（或瓷板1块

6、），用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞和0细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和0型试剂红细胞悬液1滴。（3）将玻片（或白瓷板）不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀,连续约l5min,肉眼观察有无凝集（或溶血）反应。如用玻片做试验时，也可用低倍镜观察结果。3、微柱凝胶血型卡法。【附注】1、分散血清质量性能应符合商品合格试剂的要求，试验结束后应放置冰箱保存，以免细菌污染。2、试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混合，用生理盐水洗涤3次，以除去存在于血清中的抗体及可溶性抗原。3、试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。4、操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液,市XX

7、区人民医院输血科工作制度文件编号SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-002页 号第5页共10页版本/修改次数第3版第0次修改ABO血型鉴定审核人XX批准人XX发布日期20XX年04月20日以便容易核实是否漏加血清。5、IgM抗A和抗B与相应红细胞的反应温度以4为最强，但为了防止冷凝集的干扰，一般仍在室温（2024C）下进行试验，37可使反应减弱。6、离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防止出现假阳性或假阴性。7、观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱排列的区别。8、判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。表1 ABO血型正反定型结果标准血清+受检者红细胞受检者血型受检者

8、血清+试验红细胞抗A抗B抗A+BA细胞B细胞 0细胞+A+ -+B+ O+ -+AB 注：+:凝集或溶血；-：不凝集。【正反定型结果不致的原因】有技术性问题或红细胞和血清本身的问题，常见者有以下几种。1、标准血清效价太低、亲和和不强。如抗A血清效价不高，可将A亚型误定为。型，AB型误定为B型。市XX区人民医院输血科工作制度文件编号SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-002页 号第6页共10页版本/修改次数第3版第0次修改ABO血型鉴定审核人XX批准人XX发布日期20XX年04月20日2、红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显,误判为阴性反应。3、受检者红细胞上抗原点过少，如

9、亚型；或抗原性减弱，见于白血病或恶性肿瘤；以及类B呈cisAB等。4、受检者血清中蛋白紊乱（高球蛋白血症），或实验时温度过高,常引起红细胞呈缗钱状排列。5、受检者血清中缺乏应有的抗A （或）抗B抗体，如丙种球蛋白缺乏症。6、各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。7、由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集，往往是正反定型不符的原因。8、血清中有ABO血型以外的抗体，如自身抗L常引起干扰。【正反定型结果不一致的解决办法】如发现ABO正反定型结果不一致，首先要重复做试验1次，严格执行操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察结果，可解决明显的问题，对一些疑

10、难问题必须及时请示上级主管，并进一步检查。初步的检查步骤如下：2、 另从受检者采取1份新鲜血液标本，这样可以纠正因污染或搞错标本造成的不符合。市XX区人民医院输血科工作制度文件编号SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-002页 号第7页共10页版本/修改次数第3版第0次修改ABO血型鉴定审核人XX批准人XX发布日期20XX年04月20日2、将红细胞洗涤数次，配成5%盐水细胞悬液，用抗A、抗B、抗A+B及抗H做试验，可以得到其他有用的信息。3、对受检红细胞作直接抗人球蛋白试验，如结果是阳性，表示红细胞已被抗体致敏。4、用A1、A2 B、。红细胞及自身红细胞检查受检血清。如果怀疑是抗I,用。型(

11、或ABO相合的)脐血红细胞检查。5、如果试验结果未见凝集,应将细胞及血清试验至少在室温和4放置30min,用显微镜检查核实。6、如疑为A抗原或B抗原减弱，则可将受检红细胞与抗A或抗B血清作吸收及放散试验，以及受检者唾液作A、B、H血型物质测定。后者只对8O%HAB分泌型的人有用。7、如试验结果红细胞呈缗钱状排列，加等渗盐水1滴混匀，往往可使缗钱现象消失。应注意不应先加盐水1滴于受检者血清吕，再加试剂红细胞做试验，以免使血清中抗体被稀释。8、如受检者为A型血而疑为有类B抗原存在时，可用下列方法进行鉴别。(1)观察细胞与抗A及抗B的凝集强度，与抗A的反应要比与抗B的反应强。这种区别用玻片法做试验更

12、为明显。(2)用受检者红细胞与自身血清做试验，血清中的抗B不凝集自市XX区人民医院输血科工作制度文件编号SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-002页 号第8页共10页版本/修改次数第3版第0次修改ABO血型鉴定审核人XX批准人XX发布日期20XX年04月20日身红细胞上的类B抗原。(3)检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出A物质或(和)B物质。(4)核对患者的诊断。类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴性杆菌感染有关。9、如发现多凝集现象，应考虑由遗传产生的Cad抗原活性、被酶激活的T或TK受体，或产生机制不太明了的Tn受体所引起。多凝集红细胞具有以下特点。(1)能被人和许多家

13、兔的血清凝集。(2)能与大多数成年人的血清凝集，不管有无相应的同种抗体。(3)不被脐带血清凝集。(4)通常不与自身的血清凝集。(5)如有条件可用外源凝集素加以鉴别。【附】A、B、0试验红细胞悬液的制备1、分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次,以压紧红细胞配成不同浓度的红细胞悬液(表2)表2 红细胞悬液的配制市XX区人民医院输血科工作制度文件编号SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-002页 号第9页共10页版本/修改次数第3版第0次修改ABO血型鉴定审核人XX批准人XX发布日期20XX年04月20日悬液浓度()压实红细胞(滴)盐水(滴)212.0ml(40)510.8ml(

14、16)1010.4ml(8)2010.2ml(4)2、为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取3个以上的健康成人血液，按A、B、O型分别混合后，按上法制备。3、如条件许可，可分别制备A1、A2,及其他亚型的红细胞悬液,以供ABO亚型鉴定时参考。4、如欲将红细胞保存，应严格注意无菌技术采取血液，以ACD保存液按4： 1抗凝，置4冰箱可保存3周，临用时取出一部分经盐水洗涤后配制成需的浓度。如以红细胞保存液保存，在4C下可保存45周。红细胞保存液的配法：5. 4%葡萄糖液640ml及109mmolL枸椽酸钠264ml混合后，如新配的1%硫柳汞液1. 8ml,经高压灭菌的(110,15min)溶液最后pH为7. 4,使用时血液与保存液的容积比为6 ： 1。二、A1和A2亚型鉴定【原理】根据ABO血型的血清学特点，A型和AB型可分为&