输血科凝聚胺介质配血、不完全抗体筛查试验SOP.docx

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1、浙江省XX市XX县人民医院输血科凝聚胺介质配血、抗体筛查试验SOP页数/总页数1/3版序C版文件编号SXK-S0P-3.5测定方法凝聚胺介质法原理红细胞表面带有大量的负电荷，以避免其产生自发性聚集，当红细胞悬浮在电解质时，阳离子会被红细胞的负电荷吸引，此时红细胞被扩散的双层离子云围绕形成Zeta电位,Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。凝聚胺（Polybrene）试验是利用一种低离子溶液（LIM）,降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（浆）中的抗体结合。其后加人凝聚胺（Polybrene）溶液，它是一种高阶阳离子多聚物、肝素中和剂，溶解后能产生很多正电荷，可以中和

2、红细胞表面带有的负电荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异的凝聚。最后加入悬浮液（Resuspending）,Resuspending具有中和凝聚胺（Polybrene）的作用，使正常的红细胞非特异性凝集散开，结果为阴性；但红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，结果为阳性。试剂交叉配血试验试剂来源：珠海贝索生物技术有限公司。贮存：2-25摄氏度贮存。1、LIM （LOW Lonic Medium）：低离子介质溶液2、Polybrene Solution:凝聚胺溶液3、Resuspending Solution:悬浮液 4、阳性对照抗体筛选试剂

3、来源：上海血液生物医药责任有阴公司。贮存：2-25摄氏度贮存。I、II、I型抗体筛选红细胞。质量控制每天取RHDIgG抗血清稀释后作为阳性对照血清与RHD阳性红细胞做交叉试验,详细步骤同交叉配血试验5,结果凝集为合格。质控在控试剂方可用于交叉配血检测，如失控要查找原因采取处理措施，并在日常工作记录表中记录质控情况。试剂新开瓶或出现可疑情况时需加做质控。每次交叉配血时需同步进行质控操作。操作步骤一、交叉配血试验：1、取试管参支，标主次测和混合管。主测管加病人血清（浆）2滴，加供血者35%红细胞悬液1滴。次侧管加供血者血清（浆）2滴，加病人35%血球1滴。混合管加病人血清（浆）2滴35%血球1滴、

4、供血者血清（浆）2滴35%红细胞悬液1滴。浙江省XX市XX县人民医院输血科页数/总页数2/3版序C版凝聚胺介质配血、抗体筛查试验SOP文件编号SXK-S0P-3. 52、各加LIM 0. 7l,混合均匀后,再各加Polybrene溶液2滴,并混合均匀,室温孵育15秒。两液必须按顺序加入。3、3400rPm （相当于1000g离心力），离心10秒，然后把上清液倒掉，不要沥干,让管底残留约0.1ml液体。4、轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。5、最后加2滴ResusPending 2滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果。如果在30秒至1分钟内凝集散开，代表是由Polybrene

5、 （凝聚胺）引起的非特异性聚集,配血结果相合；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体的特异性反应，配血结果不相合。如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察有无凝集。二、抗体筛检试验1、取试管三支，各加病人血清（浆）2滴，分别加入35%筛检红细胞（I、II、III）各1滴。2、各加LIM 0. 7ml,混合均匀后，再各加Polybrene溶液2滴，并混合均匀。3、3400rPm,离心10秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1m液体。4、轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。5、最后加入ResusPending 2滴，轻轻转动试管混合并观察结果。如凝集散开，表示由Poly

6、brene （凝聚胺）引起的非特异性聚集，抗体筛检结果为阴性。如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，抗体筛检结果为阳性，应进一步作抗体鉴定。三、结果判断交叉配血试验抗体筛检试验判断病人血清中没有异体抗体，供血者血液适用。+病人血清中有异体抗体，但此供血者血液适用，建议继续作抗体鉴定试验。+病人血清中有异体抗体，此供血者血液不适用，换其他供血者的血液做配血试验。+病人血清中有异体抗体，此供血者血液不适用。但其所作用的抗原为稀有抗原，可能仅存在于此供血者的血球上，三种筛检红细胞上无此抗原。换其他供血者的血液做配血试验。浙江省XX市XX县人民医院输血科页数/总页数3/3版序C版凝聚胺介质

7、配血、抗体筛查试验SOP文件编号SXK-S0P-3. 5临床意义用于完全抗体及不完全抗体的筛选检测、交叉配血、红细胞抗原检测等。注意事项1、可以用含EDTA抗凝血浆代替血清使用。2、若病人血清（血浆）含有肝素（Heparin）,如洗肾患者，须多加4-6滴Polybrene （凝聚胺溶液）以中和肝素。3、试剂使用前需回复室温再行操作。4、冬季室温较低，应将试管保温或提高室温。以防冷凝集干扰。若怀疑病人有寒冷凝集素等因素，而导致假凝集，可在最后滴入ResusPending时;将试管立即置入37摄氏度水浴中，轻轻转动试管混合，并在30秒内观察结果。参考资料试剂说明书、临床检验管理与技术规程浙江大学出版社第一版起草人审核人审核日期起用日期2011040120110401