唑来磷酸联合氟尿嘧啶对乳腺癌MCF-7细胞生长的影响.docx

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1、噗来磷酸联合氟尿喀咤对乳腺癌MCF-7细胞生长的影响孙湘媛，施祖勇湖南省澧县人民医院药剂科摘要目的探讨噗来瞬酸与氟尿喀咤联合使用是否具有协同抗乳腺癌生长的 作用。方法 以乳腺癌细胞系MCF-7为研究对象，采用不同浓度的噗来磷酸和氟 尿喀咤处理MCF-7细胞，并用最佳浓度的噗来磷酸与氟尿喀咤联合处理，并设 立无药物处理为对照组，利用CCK-8方法检测各组细胞增殖率，Calcein-AM/PI 检测各组细胞凋亡率-结果CCK-8结果显示，与对照组相比，不同用药组对 MCF-7细胞的生长均有一定的抑制作用，且均有统计学意义(P0.05),其中， 氟尿喀咤贯序噗来磷酸组对乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制

2、作用最强； Calcein-AM/PI双染色法检测结果显示单药组凋亡率显著升高，噗来磷酸组对乳 腺癌MCF-7细胞的凋亡率达13.7%,氟尿喀咤组对乳腺癌MCF-7细胞的凋亡率 区23.9%,差异均县有统计学意义(P0.05).其中，氟尿喀咤贯序噗来磷酸组对 乳腺癌MCF-7细胞的凋亡影响最大，高达52.9%。结论 噗来磷酸与氟尿喀咤联 合使用时具有协同抗肿瘤作用。关键词乳腺癌；联合用药；氟尿喀咤；噗来磷酸The growth effect of different combination ways of zoledronic acid with fluorouracilon MCF-7 br

3、east cancer cells基金项目：国家自然科学基金青年基金项目()SUN Xiang SHI ZuyongDepartment of pharmacy, Lixian people*s hospital, Changde 415500, Hunan, CHINA Abstract Objective To study the antitumor effect of combination ways of fluorouracil with zoledronic acid on MCF-7 breast cancer cells. Methods The breast cancer c

4、ell line MCF-7 was used as the research object. The MCF-7 cells were treated with different concentrations of zoledronic acid and fluorouracil. The optimal concentration of zoledronic acid and fluorouracil were combined to treat the cell line, and the drug-free group was control group. The cell prol

5、iferation rate was detected by CCK-8 method, and the apoptosis was detected by Calcein-AM/PI. Results CCK-8 results showed that compared with the control group, different drug groups had a certain inhibitory effect on the growth of MCF-7 cells, and the difference was statistically significant (P0.05

6、). However, the fluorouracil sequential zoledronic acid group had the strongest growth inhibitory effect on breast cancer MCF-7 cells; in addition the Calcein-AM/PI double staining method showed that the apoptosis rate of the single drug group was significantly increased, The apoptosis rate of MCF-7

7、 cells treated with zoledronic acid was 13.7%, and treated with fluorouracil was 23.9%. The difference was statistically significant (P0.05). Among them, the fluorouracil sequential zoledronic acid group had the greatest effect on the apoptosis rate of breast cancer MCF-7 cells was 52.9%, Conclusion

8、 The combination of zoledronic acid and fluorouracil has synergistic anti-tumor effect.Keywords Breast cancer; Combination therapy; Fluorouracil; Zoledronic acid多年来，无论是发病率还是死亡率，乳腺癌(breast cancer, BC) 一直位居女 性癌症的首位，已超过肺癌成为全球发病率的主要原因之一山。最新统计数据发 现，在2020年乳腺癌新发病例约230万，占所有癌症病例的.7%转移性乳 腺癌病人中将近有80%的患者会发生骨转移，

9、导致破骨细胞活性增加、局部骨 破坏和骨骼并发症，包括疼痛、高钙血症和骨骼相关事件。噗来膝酸(zoledronic acid, ZA)是一种第三代含氮双瞬酸盐类药物，是治疗与乳腺癌相关的骨病的主 要药物。A主要通过抑制甲羟戊酸途径的关键酶法呢基焦磷酸(farnesyl pyrophosphate, FPP)合成酶，从而阻断破骨细胞介导的骨吸收。在几项临床试 验中分析了辅助噗来膝酸治疗对乳腺癌患者总生存期的影响。这些试验表明，在 ABCSG-12试验和ZO-FAST试验中，接受与噗来膝酸联合辅助治疗的患者的 无病生存期提高了56。然而，在AZURE试验中发现，与单独辅助治疗相比， 接受辅助治疗联合

10、噗来瞬酸的患者总体存活率增加。且有研究表明，噗来瞬酸 的抗肿瘤和抗转移特性可能直接抑制血管生成、肿瘤细胞增殖和在骨中的粘附， 并诱导肿瘤细胞凋亡。本文主要研究噗来瞬酸与氟尿喀咤联合使用是否具有 协同抗乳腺癌生长的作用,为临床上联合用药提供一定的理论依据。1.材料与方法1.1材料乳腺癌MCF-7细胞系购自中国cellcook公司，高糖DMEM培养基（美国 Gibco）,胎牛血清美国HyClOne上，青霉素-链霉素购自上海麦克林生化科 技有限公司，噗来磷酸注射液购自美国诺华公司，CCK-8试剂盒_（日本同仁）。 1.2方法1.2.1 细胞生长的曲线绘制乳腺癌MCF-7细胞培养基为DMEM培养基（含

11、10%胎牛血清），培养于 37, 5%的二氧化碳细胞培养箱中。待细胞长至快速生长期时，用胰酶消化细 胞，均匀种于24孔板中，细胞密度为2000个/孔，每组3个重复孔；按照第1、 2、3、4、5、6、7天每天进行计数，并计算均值绘制生长曲线。1.2.2 细胞增殖检测按照试剂盒说明书要求,先确定最佳细胞密度，将处于对数生长期的MCF-7 以IXIO4个/孔接种到96孔板中，每仝孔加入100 L的细胞悬液，每个检测点设 置3个重复孔。96孔板四周孔中加同等体积的PBS,以防板中细胞培养液蒸发 过快。将培养板在5%CO2培养箱中预培养24 h。按照试剂盒说明书进行检测， 用酶标仪在450 nm处测定吸

12、光度。As：实验组（含有细胞的培养基、CCK-8、 药物），Ac：对照组,Ab：空白孔，计算公式：细胞存活率=KAS-Ab）/（AC-Ab） 100%o1.2.3 细胞凋亡检测利用CaICein-AM/PI法检测细胞凋亡二将MCF-7细胞培养后培均匀的铺于6 孔板中培养过夜，设阴性对照组（不加药物处理）和实验组（加药物处理）， MCF-7细胞在加入不同浓度的药物24 h后；按照Calcein-AM/PI检测方法处理 细胞并收集细胞经流式细胞仪检测上机检测，每组3个重复孔口1。1.3统计学处理应用GraPhPadPriSm 8.0对数据进行统计学分析，数据以s表示，组间比较 采用t-test,

13、P (47.602.54)%和(35.90+3.69)%,用 药组与对照组相比，差异均有统计学意义(*P0.05)其中，d组对MCF-7细胞 的生长抑制作用最强，但其与c、e两组联合用药方案比较，对细胞的抑制率有 显著的差异(*P0.01)与单一用药组比较，联用药物对MCF-7细胞的抑制率均 明显强于单一用药组(*P0.05),表明联合用药组对乳腺癌细胞生长增殖抑制效 里优于单一用药组(图2)。50-*图2噗来磷酸和氟尿喀咤不同用药顺序对MCF-7细胞增殖的影响2.3 噗来瞬酸联合氟尿喀咤的用药顺序对MCF-7细胞凋亡的影响为了进一步研究噗来磷酸和氟尿喀咤联合用药对MCF-7细胞的影响，设定

14、不同的给药方式：a组：单药嗖来磷酸、b组：单药氟尿喀咤、c组：联合用药 组、d组：氟尿喀咤贯序噗来磷酸组、e组：噗来磷酸贯序氟尿喀咤组。利用 Calcein-AM/PI双染色法检测给药后对MCF-7细胞的影响发现,与对照组相比, 单药组凋亡率显著升高，a组对乳腺癌MCF-7细胞的凋亡率达13.7%, b组对乳 腺癌MCF-7细胞的凋亡率为23.9%,差异均有统计学意义（*P0.05）.其中，d组 对乳腺癌MCF-7细胞的凋亡影响作用最大，高达52.9% （见表1）。表1噗来磷酸和氟尿喀咤不同用药顺序对MCF-7细胞凋亡的影响组另IJ活细胞（）凋亡率（%）对照组95.90.260.00睡来磷酸组74.41.7613.72.67*氟尿喀咤组71.3+2.3123.9+1.30*同时用药组64.93.1629.5+2.15*噗来磷酸贯序氟