人民医院检验科细菌项目检验作业指导书SOP汇编.docx

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1、XX市XX区人民医院检验科作业指导书文件编号LAB-WHSCDQRMYY-SOP. XJ-05-001页 号第1页共2页版本/修改次数第3版第0次修改细图室标本操作流程审核人XX批准人XX发布日期20XX年05月16日细菌室标本操作流程1、标本的接受1.1标本接受的时间：原则上全天任何时间均右。1. 2标本的接受：接受标本者要认真核对标本的数量，标本与检验单要求是否橡皮筋以及标本的质量等。1. 3把接受的标本编号。2、临床标本的接种。2.1检验目的：细菌培养+药敏试验2. 1. 1 标本类型培养基选择血血培养瓶中段尿血平板，麦康凯平板，L菌平板脑脊液血培养瓶，血平板，巧克力平板穿刺液培养瓶，血

2、平板，巧克力平板，麦康凯平板胆汁肉汤，血平板，巧克力平板，麦康凯平板呼吸道标本血平板，麦康凯平板，巧克力平板粪便标本SS平板，麦康凯平板和血平板病灶分泌物血平板，巧克力平板，麦康凯平板2. 1. 2生殖器标本根据临床医生所写的检验项目接种相应的平板及操作:淋球菌培养接种淋球菌平板,念珠菌培养接种沙保罗培养基,支原体培养则按支原体培养的操作规程操作，作普通细菌培养，则接种血平板和巧克力平板，衣原体抗原检测按衣原体抗原检测的操作规程进行检验。2. 2接种的方法：中段尿标本无菌取10HL在血平板的中间作垂直划线，然后分离划线，其他基本作分区划线。2. 3检验目的为抗酸杆菌的按找抗酸杆菌的操作规程进行

3、检验。3、所接种的平板必须写上标本的编号和接种的日期，然后根据要求进行培XX市XX区人民医院检验科作业指导书文件编号LAB-WHSCDQRMYY-SOP. XJ-05-001页 号第2页共2页版本/修改次数第3版第0次修改细图室标本操作流程审核人XX批准人XX发布日期20XX 年 05 月 16 B平板培养条件温度血平板CO2孵箱或普通孵箱35-37巧克力平板CO2孵箱或普通孵箱35-37淋球菌平板CO2孵箱或普通孵箱35-37沙保罗平板CO2孵箱或普通孵箱28-31其他的平板CO2孵箱或普通孵箱35-374、标本的培养的条件，温度、时间:5、根据生长的平板上的细菌菌落的形态,时间18-24小

4、时18-24小时18-24小时24-36小时18-24小时菌落涂片，染色，镜检等来综合养。判断细菌的形态和染色性质，按各属鉴定的作业指导书进行各菌属的常规鉴定及药敏试验。6、结果的报告确认的细菌鉴定及药敏试验结果后，进行检验单结果报告的存盘，打印。7、对各类细菌培养标本除特殊要求外，我室细菌标本在接种后每天按要求进行无害化处理。修改状态/日期修改记录修改代号修改单号修改人/日期XX市XX区人民医院检验科作业指导书文件编号LAB-WHSCDQRMYY-SOP. XJ-05-002页 号第3页共6页版本/修改次数第3版第0次修改临床细菌检验工作的基本要求和技术审核人XX批准人XX发布日期20XX年

5、05月16日临床细菌检验工作的基本要求和技术一、对临床细菌检验人员的要求1、负责鉴定及签发报告的主管技术人员应通晓诊断细菌学的全面知识。2、一般细菌室工作人员均应具备细菌传染、消毒、灭菌的知识。3、通晓细菌室守则，并严格遵守。4、负责人应不断更新知识，了解细菌学检验的新进展。5、定期或随时与临床医师联系，主动参与临床病例讨论，了解病情及治疗情况，达到细菌检验与临床的密切联系。6、工作人员应定期进行健康体验及必要的预防接种，增强自身抵抗能力。二、工作人员守则在细菌室工作人员应注意，既不要给室内带来污染，也不要被室内的微生物感染。工作人员必须遵守以下规则：1、穿专用的工作衣、帽入室；必要时戴口罩。

6、2、不允许无关人员进入实验室。3、室内禁止饮食、吸烟、闲谈等非专业活动。4、养成在室内手不触及口、脸、头发及身体的习惯。5、操作中不可说话，以免口中飞沫污染标本。6、每次完成工作和离开实验室前，应用肥皂洗手，接触了致病菌类，须用消毒剂消毒手。7、个人物品不许带入室内。8、当工作环境被细菌培养物污染，必须用适当的强消毒液泼撒覆盖污染物,并报告主管人员采取必要的措施。9、工作人员被细菌培养物污染，应用弱或中等消毒剂清洗，必要时应给予药物治疗，并向主管负责人报告，进一步采用特殊措施。基本染色方法染色的第一步是制作涂片。菌液涂片时，用接种环沾取菌液点在载玻上，本可直接在玻片上涂布。菌落涂片时，先取生理

7、盐水1滴，置玻片上，用接种针挑取菌落，在盐水中涂布。涂片时必须注意应轻轻操作。猛烈的动作会改变菌细XX市XX区人民医院检验科作业指导书文件编号LAB-WHSCDQRMYY-SOP. XJ-05-002页 号第4页共6页版本/修改次数第3版第0次修改临床细菌检验工作的基本要求和技术审核人XX批准人XX发布日期20XX年05月16日胞原有的排列形式，或造成细菌鞭毛脱落，影响结果的准确性。制备的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细胞形态改变。将固定的涂片进行染色。一、革兰染色本染色是最基本的染色法，可用于标本涂片或菌落涂片。染色结果将细菌分为革兰阳

8、性（紫色）和革兰阴性（红色）两类。试剂1、结晶紫溶液A液：结晶紫 2g95% 乙醇20mlB液：草酸镂0.8g蒸储水80ml需在用前24h将A液、B混合，过滤后装入试剂瓶内备用。2、碘液碘1g碘化钾2g蒸馄水 300ml碘与碘化钾混合并研磨，加入几毫升水，使其逐渐溶解，然后研磨，继续加入少量蒸储水至完全溶解，最后补足水量。也可用少量蒸馄水，先将碘化钾完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后,加水至300ml。3、脱色液：95%乙醇。4、复染液A、贮存液：沙黄2.5g95% 乙醇100mlB、应用液：A液10ml蒸储水90ml染色方法：1、涂片经火焰固定，加结晶紫液染lmin,清水冲去染液。XX市XX

9、区人民医院检验科作业指导书文件编号LAB-WHSCDQRMYY-SOP. XJ-05-002页 号第5页共6页版本/修改次数第3版第0次修改临床细菌检验工作的基本要求和技术审核人XX批准人XX发布日期20XX年05月16日2、加碘液染lmin,水洗。3、加脱色液，不时摇动约1030S,至无紫色脱落为止，水洗。4、加复染液，染30S,水洗。5、干后镜检。二、抗酸染色抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率，染厚涂片时，须掌握复染色时间。如果背景过深，影响镜检。奴卡菌及放线菌可呈弱抗酸性，取培养菌落涂片染色时，呈现两种现象，视野中有些菌细胞阳性，另外一些则阴性；有时同一个

10、菌体上，红色的深浅亦有不同，观察时应预注意。抗酸染色有两种常用方法：(1)碱性复红法又称萋纳(Ziehl-Neelsen)法。(2)荧光染料金胺0法(也称金胺罗丹明B法)。(-)碱性复红染色法试剂1、萋纳石炭酸复红溶液碱性复红乙醇饱和溶液10ml5%石炭酸溶液90ml2、脱色剂 *浓盐酸3ml95% 乙醇97ml3、复染液(吕弗勒美蓝液)美蓝乙醇饱和溶液30ml10%氢氧化钾0.1ml蒸储水100ml染色方法1、涂片经火焰固定，加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸汽出现，切不可XX市XX区人民医院检验科作业指导书文件编号LAB-WHSCDQRMYY-SOP. XJ-05-002页 号第6页共6页版

11、本/修改次数第3版第0次修改临床细菌检验工作的基本要求和技术审核人XX批准人XX发布日期20XX年05月16日沸腾。染5min （若染色奴卡菌需要加长时间），水洗。2、加脱色剂，不时摇动玻片至无红色脱落为止，水洗。3、加复染液，染0.5lmin,水洗。4、干后镜检，分枝杆菌呈红色，背景为蓝色。*:奴卡菌、放线菌标本染色时，脱色剂改用2%硫酸水溶液。（二）金胺O-罗丹明B染色法染剂1、罗丹明B液：罗丹明B 0.1g加蒸僧水100ml。2、0.1%金胺0液：金胺O 0.1g加蒸锵水95ml,再加入纯石炭酸5ml,混匀；3、3%盐酸酒精；4、稀释美蓝液：吕弗勒美蓝液10ml,加蒸储水90mL混匀；方

12、法1、涂片固定后加第1液3第90S .2、弃去第一液后加第2液染15min3、用第3液脱色l2min,水洗。4、滴加第4液染30S,水洗，待干，荧光抗酸菌在暗背景中呈现金黄色荧光。三、鞭毛染色用于观察菌体上有无鞭毛，鞭毛在菌体上的位置以及鞭毛的数量。在细菌鉴定中，特别是非发酵菌的鉴定中很重要。鞭毛染色可以直接从平板上挑选菌落，或从斜面上刮菌苔涂片即可，但必须注意动作尽量轻，以免鞭毛从菌体上脱落。菌落应是生长在营养较好地琼脂平板（如血平板、营养琼指）上的过夜培养物。不可采用有抑制剂的选择性培养基,如中国蓝、麦康凯、SS琼脂等。观察鞭毛时，应耐心寻找整个涂片上的菌细胞,因为并不是涂片上每个细菌细胞

13、上的鞭毛特性及数量都一样，应以鞭毛数量最多XX市XX区人民医院检验科作业指导书文件编号LAB-WHSCDQRMYY-SOP. XJ-05-002页 号第7页共6页版本/修改次数第3版第0次修改临床细菌检验工作的基本要求和技术审核人XX批准人XX发布日期20XX年05月16日的菌细胞为准。鞭毛染色（改良RyH法）试剂A液：5%石炭酸10ml糅酸2g饱和硫酸铝钾液10mlB液：结晶紫酒精饱和液应用液：A液10份，B液1份，混合，室温存放。染色方法：1、玻片的处理：要求用新的载玻片，用前须在95%酒精中浸泡24小时，用时从酒精中取出，以干净纱布擦干后使用。2、在玻片上滴蒸储水两滴。一张玻片上可同时制

14、2个玻片。3、用接种环挑取血平板上菌落少许，将细菌点在玻片上的蒸储水滴的顶部。一般只需点一下，仅允许极少量细菌进入水滴，不可搅动，以免鞭毛脱落。4、玻片置室温自然干燥。5、滴加染液于玻片上，染色。6、约1015min后，用蒸储水缓慢冲去染液。冲洗时应避免使染液表面的金属光泽液膜滞留在玻片上，影响镜检。7、玻片自然干燥后，镜检时应从涂片的边缘开始，逐渐移向中心。寻找细菌较少的视野，鞭毛容易观察。细菌密集的地方，鞭毛被菌体挡住，不易观察。四、异染颗粒染色用于白喉棒状杆菌染色，异染颗粒可明显地被显示出来。标本直接涂片或细菌涂片均可用改良何伯特（Albert）法染色来观察异染颗O试齐IJ甲液：甲苯胺蓝 0.15g孔雀绿0.2g冰醋酸1mlXX市XX区人民医院检验科作业指导书文件编号LAB-WHSCDQRMYY-SOP. XJ-05-002页 号第8页共6页版