猴痘病毒核酸检测试剂注册审查指导原则（征求意见稿).docx

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1、123456789101112131415161718192021222324252627猴痘病毒核酸检测试剂注册审查指导原则（征求意见稿）本指导原则旨在指导注册申请人对猴痘病毒核酸检测 试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门 提供参考。本指导原则是对猴痘病毒核酸检测试剂的一般要求， 申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用。若 不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品 的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。本指导原则是供注册申请人和技术审评人员使用的指 导性文件，但不包括审评审批所涉及的行政事项，亦不作 为法规强制执行，应在遵循相关法规的前提下使用本指导

2、原则。如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以 采用，但是需要提供详细的研究资料和验证资料。本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水 平下制定，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的 不断发展，相关内容也将适时进行调整。一、适用范围本指导原则适用于采用实时荧光PCR法，对皮肤病变 标本（包括病变皮疹、痘疱表面和/或渗出物的拭子，痘疱 液，痘疱表皮或痘痂等）、咽拭子、全血或血清样本等样本 中的猴痘病毒核酸进行体外定性检测的试剂。对于采用其他方法学的猴痘病毒核酸检测试剂，可能 部分要求不完全适用或本文所述内容不够全面，申请人应 参照本指导原则，根据产品特性对适用部分进行评价，并 补充其

3、他的评价资料。2829303132333435363738394041424344454647484950515253本指导原则适用于猴痘病毒核酸检测试剂注册申请和 变更注册申请的情形。本指导原则针对猴痘病毒核酸检测 试剂注册申报资料中的部分内容进行撰写，其他未尽事宜 应当符合关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批 准证明文件格式的公告等相关法规要求，同时建议参考 定性检测试剂分析性能评估注册审查指导原则等适用 的技术文件要求。二 注册审查要点（一）监管信息1 .产品名称及分类编码产品名称应符合体外诊断试剂注册与备案管理办法 及相关法规的要求，如猴痘病毒核酸检测试剂盒（荧光 PCR法）。根据

4、体外诊断试剂分类规则，该产品按照 第三类体外诊断试剂管理，分类编码为6840。2 .其他信息还包括产品列表、关联文件、申报前与监管 机构的联系情况和沟通记录以及符合性声明等文件。（二）综述资料综述资料主要包括概述、产品描述、预期用途、申报产 品上市历史及其他需说明的内容。应详细说明产品所采用的 技术原理及检测流程。提供不同适用机型的检测通量，即一 次检测最多可检测的样本数。提供核酸提取（手工和自动提 取方式应分别明确）和PCR扩增的时间，以及检测全过程所 需的时间。不同检测流程，分别提供最少和最多检测样本量 下的检测时间。与已上市同类产品进行比较，比较内容包括 样本类型，检测原理，检测靶基因，

5、组成成分，内标，质控 品，判读规则，分析性能和临床性能等。5455565758596061626364656667686970717273747576777879预期用途中明确产品检测的靶基因，需选择保守性和 特异性相对较高的基因，同时还应考虑基因的扩增效率。 检测基因的选择应提供相关指南或文献，并分析所检测基 因的灵敏度和特异性是否符合临床需求。（三）非临床资料1 .分析性能研究注册申请人应采用在符合质量管理体系的环境下生产 的试剂盒进行所有分析性能研究，提交具体研究方法、试 验方案、试验数据、统计分析等详细资料。分析性能评估所用样本的基本信息均需明确，例如样 本来源、样本类型、采集和处理方

6、式、稀释方式、定值过 程及数据等。研究中采用的猴痘病毒阳性样本，应采用科 学合理的方法确定其阴阳性和浓度水平，提交具体的试验 资料。分析性能评估用样本一般应为真实样本，可采用境 内外样本进行研究。如涉及稀释后检测，应采用与适用样 本类型一致的阴性基质。不可采用质粒、假病毒等，进行 分析性能评估。对于各项性能中采用的样本，在下述各项 性能研究资料中分别提供样本信息列表。精密度、检出限 和包容性研究中所用样本应相互独立。1.1 样本稳定性对采集后各阶段的样本进行稳定性研究，包括不同保 存液、裂解液，不同灭活方式处理后的样本，研究内容包 括冷藏保存时间，冷冻保存时间，冻融次数等。建议对每种样本类型均

7、进行稳定性研究，研究样本应 至少包含弱阳性和阴性样本。如核酸提取液可不立即进行检测，还需对核酸提取液的保存条件和稳定性进行研究。80818283848586878889909192939495969798991001011021031041051.2 适用的样本类型列明产品适用的样本类型，如皮肤病变标本（包括病 变皮疹、痘疱表面和/或渗出物的拭子，痘疱液，痘疱表皮 或痘痂等）、咽拭子、全血或血清样本，应分别进行分析性 能评估。1.3 企业参考品验证（如适用）根据主要原材料研究资料中的企业参考品设置情况， 采用三批产品对企业参考品进行检验并提供详细的试验数 据。L4准确度可采用方法学比对或参考品

8、（盘）检测的方法进行研 究。L5精密度应对精密度指标，如标准差或变异系数等的评价标准 做出合理要求。应考虑运行、时间、操作者、仪器、试剂 批次和地点等影响精密度的条件，设计合理的精密度试验 方案进行评价。精密度评价试验应包含核酸提取步骤。设 定合理的精密度评价周期，例如为期至少20天的检测。对 检测数据进行统计分析，获得重复性、实验室内精密度、 实验室间精密度、批间精密度等结果。采用临床样本或病毒培养物进行精密度评价，应至少 包含3个水平：阴性样本、临界阳性样本、中/强阳性样本, 并根据产品特性设定适当的精密度要求，例如：阴性样本：不含待测物，阴性检出率应为100%（n20）o10610710

9、8109110111112113114115116117118119120121122123124125126127128129130131临界阳性样本：待测物浓度略高于试剂盒的检出限， 阳性检出率应95% (t220)o中/强阳性样本：待测物浓度呈中度到强阳性，阳性检 出率为IOo%且Q值的CV5% (t220)o1.6 包容性1.6.1 采用生物信息学方法对产品检测的包容性进行研 究，研究应覆盖权威数据库中已公布的猴痘病毒核酸序列。1.6.2 验证具有时间和区域特征性的至少10个不同来源 的阳性样本，包含分支I、分支II和重点亚分支及变异株。 研究应包括检出限和重复性的验证。1.7 检出限

10、1.7.1 检出限的确定建议将不同来源的至少3个样本系列稀释于与适用样本 一致的基质中，进行检出限的确定。每个浓度梯度重复检 测，记录不同浓度检出的结果，采用适当的模型(如Probit 分析)和分析方法，将具有95%阳性检出率的最低浓度水 平作为确定的检出限。申请人可采用数字PCR,标准曲线 等方法进行毒株核酸浓度的确认，以COPieSmL作为毒株浓 度的表示方式。此外还可采用半数组织感染量测定法 (TCID50)的方法进行毒株浓度确认，以TClD5omL作为毒 株浓度的表示方式。172检出限的验证选择另外3例不同来源的猴痘病毒样本在检出限浓度水 平进行验证，应达到95%阳性检出率。如检测试剂

11、包括多个检测靶标，应分别进行LoD研究。 如采用毒株进行LOD研究，应将稀释后毒株置于配套拭子132133134135136137138139140141142143144145146147148149150151152153154155156上，以模拟实际检测条件。1.8 分析特异性181交叉反应生物信息学分析：采用生物信息学分析方法进行研究, 应当包括人基因组和所有已知病原体。样本验证：交叉反应研究样品除特殊说明外，应采用 灭活的临床样本或添加了灭活病原体培养物的阴性临床样 本，样本基质应与预期检测样本类型一致，交叉反应研究 用样本主要考虑以下几方面：1.8.1.1 其他近缘病毒：天花病毒

12、（假病毒）、痘苗病毒、 牛痘病毒、鼠痘病毒、传染性软疣病毒、特纳河痘病毒（假病毒）、亚巴猴病毒（假病毒）等。1.8.1.2 引起出疹症状等的其他病原体：水痘-带状疱疹 病毒、风疹病毒、单纯疱疹病毒-1/-2、人类疱疹病毒6、人 类疱疹病毒7、人类疱疹病毒8、麻疹病毒、肠道病毒、梅 毒螺旋体、登革病毒、人乳头瘤病毒等。1.8.1.3 样本中可能存在的其他细菌/真菌等：金黄 色葡萄球菌、化脓性链球菌、绿脓杆菌、白色念珠菌、粪 肠球菌、丙酸杆菌、类白喉杆菌、铜绿假单胞菌、棒状杆 菌、大肠杆菌、生殖支原体、沙眼衣原体等。1814高浓度人类基因组DNA。注：病毒培养液的浓度单位可采用TCID50或PFU

13、mL, 细菌培养物浓度单位可采用CFU/mLo建议在病毒和细菌感 染的医学相关水平进行交叉反应的验证。通常，细菌感染 的水平为106cFUmL或更高，病毒为105pFUmL或更高。157158159160161162163164165166167168169170171172173174也可采用其他合理方法定值的浓度，例如核酸浓度107 copies/mL,如病原体样本或培养物不能符合上述要求，申 请人应详细说明理由。对于某些难以培养或因为生物安全 性无法培养的病原体，可采用病原体核酸样本进行交叉验 证。应提供用于交叉反应验证的病原体核酸的来源、组成 和浓度等信息，浓度可采用CoPieSmL单

14、位表示。申请人应提供所有用于交叉反应验证的病毒和细菌的 来源、种属/型别信息和浓度确认等试验资料。182干扰试验1.8.2.1内源/外源物质干扰应根据所采集样本类型，针对可能存在的内源/外源物 质干扰情况进行验证，验证推荐物质见表Io建议申请人在 每种干扰物质的潜在最大浓度（“最差条件”）条件下进行试 验，检测包含临界阳性水平在内的猴痘病毒样本。对结果 进行合理的统计分析，对比添加干扰物质前后的Q值差异。 检测的潜在干扰物包括样本中的原有物质及在样本采集和 处理期间引入的物质。表1用于干扰试验的物质类别具体物质粘蛋白、白蛋白血液（人类）适用样本类型为 咽拭子缓解咽部症状的含片、喷剂等适用样本类型为 血液时血脂、胆红素、血红蛋白、抗凝剂（如适用）适用样本为皮肤 病变组织时阿昔洛韦、氧化锌软膏、可的松软膏、止痒 膏、润肤霜、水杨酸、尿液、粪便、精液、淀 粉、润滑剂等过敏性症状缓解 药物盐酸组胺、氯雷他定、西替利嗪抗病毒药物抗生素左氧氟沙星、阿奇霉素、头抱曲松、美罗培南解热镇痛药物扑热息痛、对乙酰氨基酚、阿司匹林全身性抗菌药物妥布霉素维生素A175176177178179180181182183184185186187188189190