编制说明-实验动物 SPF猪剖腹产技术规范.docx

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1、中国实验动物学会团体标准实验动物SPF猪剖腹产技术规范编制说明中国实验动物学会团体标准实验动物SPF猪剖腹产技术规范编制说明（一）工作简况，包括任务来源、协作单位根据中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会有关文件及GB/T16733国家标准制定程序的阶段划分及代码和采用快速程序制定国家标准的管理规定的要求，结合实验动物领域具体情况，由中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会提出并组织起草本标准。起草单位为中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、东北农业大学、哈尔滨医科大学附属第二医院，主要起草人王伟、魏成威、关雪、夏长友、高彩霞、李昌文、陈洪岩、刘怀然。（二）主要工作过程、标准主要起草人及其所做的工

2、作等；1、查阅相关文献，向相关专家请教、开会讨论确定试验方案2、开展初步试验研究，得到相应的试验结果3、2023年12月10日，组织召开的2023年度团体标准启动会上，成立了实验动物SPF猪剖腹产技术规范起草组，正式进入起草阶段。主要技术内容包括仔猪的无菌控制、仔猪饲养管理、仔猪质量控制。（三）标准编写背景；实验动物是专门培育供实验用的动物，主要指作为医学、药学、生物学、兽医学等的科研、教学、医疗、诊断、生物制品制造等需要为目的而驯养、繁殖、育成的动物。是现代医学、生命科学研究的基础和条件之一，是医学、药学、生物学与兽医学研究的关键及技术瓶颈。与发达国家相比，我国实验动物研究相对滞后，实验动物

3、学的水平偏低，特别是实验动物净化、繁育技术缺乏，缺少合格的实验动物批量供应，严重制约着我国现代医学、生命科学以及兽医学等研究的发展。猪在解剖学、生理学、疾病发生机理等方面与人极其相似，在医学、生命科学研究领域中具有重要的实际应用价值。目前已用于肿瘤、心血管病、糖尿病、外科、遗传病、营养代谢病、新药评价等多方面。实验猪是经人工饲育，对其携带的病原微生物和寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚，用于科学研究、教学、生产和检定以及其它科学实验的猪。不携带重要人兽共患病原和猪烈性传染病病原的实验猪，简称普通级猪。用于猪病研究及生物制品研发、生产与检验等的猪，除符合前款各项规定外，还应无特别规定的特异

4、性病原和抗体，并符合特别规定的有关要求。除普通级猪应排除的病原外，不携带主要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的病原的实验猪，简称无特定病原体(SPeCifiCpathogen-free,SPF)猪。SPF猪是公认的标准化高等级实验动物。SPF猪作为异种移植的供体，既能解决人源器官严重不足、提供供体器官、组织，也可克服灵长类动物异种带来的伦理、烈性病毒传染病等问题，成为人类异种移植的首选供体和研究开发的热点。另外，实验猪是重大疫病防控研究以及兽用药品研发、生产、检定等领域必不可少的实验材料，实验猪的质量直接影响到实验数据的准确性和可重复性。因此，有必要开展实验猪净化、培育研究，以满足生物医学

5、对高质量实验用猪的需求。我国实验动物研究相对滞后，特别是实验动物净化、繁育技术缺乏。实验猪是疫病防控研究以及兽用药品研发、生产、检定等领域必不可少的实验材料，其质量直接影响到实验数据的准确性和可重复性。我省有多个科研机构从事猪病研究及猪用药品和生物制品研发、生产、检定等工作，因此，需要高质量的实验猪。而作为实验猪净化、生产繁育的重要技术手段，目前我国尚无SPF猪剖腹产技术规范，我们在执行国家重点研发计划项目子课题项目“SPF大白猪和长白猪培育、种群建立及质量标准研究/2017YFD0501601”时，建立了成熟的SPF猪剖腹产技术。(四)标准编制原则；本标准的编制主要遵循以下原则：1、目的性本

6、标准适用于利用生物学净化方法提高实验猪质量，对包括普通级猪、SPF猪等实验猪实施剖腹产手术获取SPF猪的操作。2、可证实性本标准的主要技术经过严谨的科学论证和验证实验，所有项目均具有可操作性。3、最大自由度原则本标准只是规定了实验动物猪剖腹产所需要的关键步骤，对不直接影响结果的内容，未做过细要求。4、合理性原则本标准结合我国实验猪的质量及使用情况合理设置，满足对实验猪的需求。（五）确定标准主要内容（如技术指标、参数、公式、性能要求、试验方法、检验规则等）的论据（包括试验、统计数据），修订标准时，应增列新旧标准水平的对比；1、妊娠母猪的选择的依据妊娠母猪应来源于未注射PRRS疫苗，临床上无猪瘟、

7、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病和猪细小病毒病等经胎盘垂直传播的疾病症状的猪场。胎次宜选择第二至第六胎妊娠母猪。剖腹产前现场采集用于检测猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病和猪细小病毒病的样本，按NY/T541规定执行。猪瘟病原按GB/T16551规定的方法进行检测和判定。猪繁殖与呼吸综合征病原按NY/T679规定的方法进行检测和判定。猪伪狂犬病病原按GB/T18641规定的方法进行检测和判定。猪细小病毒病原按SN/T1919规定的方法进行检测和判定。SPF猪胎次宜选择第二至第六胎妊娠母猪。微生物学指标按NY/T3466规定的方法进行检测和判定。由于母猪初产和多次产子后，产子数和仔猪成活数显著降

8、低，选择进行剖腹产的妊娠母猪不宜选择初产和第六胎次以上的。剖腹产手术时间的确定是决定剖腹产能否成功的重要因素，而且与仔猪的成活密切相关。时间过早，仔猪尚未成熟，剖腹产后难以成活；时间过晚，妊娠母猪可能会自然分娩，不能施行剖腹产手术。因此，需要在母猪预产期前一周观察受试母猪分娩征兆，出现阴唇红肿，奶梗明显，乳头增大变粗，最后一对乳头能挤出奶水等，尽量接近自然顺产时间进行剖腹产手术。2、术前准备的依据猪剖腹产手术前的准备与消毒是进一步净化病原的关键环节。进入屏障和隔离环境的物品都必须经过严格的消毒、灭菌。耐热、耐高压的物品，如手术器械、器具应高压或干烤灭菌；不耐热的物品，如采血针等采用环氧乙烷等灭

9、菌方法。物品传入应由紫外传递窗转入，并经过氧乙酸喷雾、紫外照射灭菌后，待用。手术室和保育猪舍使用前应进行检测，分别按照GB50333、GB14925的要求执行。麻醉药品、急救药品和常用药品等按要求准备。3、保定与麻醉的依据麻醉是猪剖腹产过程中非常重要的环节，并且剖腹产手术效果与麻醉方法密切相关。如果不使用麻醉药或用量不足，会导致动物在手术过程中感觉疼痛，从而因为动物挣扎干扰手术进程，并且和动物福利的要求背道而驰。另外，麻醉药通常对动物的呼吸有抑制作用，胎儿对麻醉药更为敏感。因此，应采取措施减轻或消除麻醉药对胎儿的影响。本文件通过吸入麻醉结合局部麻醉的方法有利于剖腹产猪血流稳定、减少唾液分泌、保

10、持呼吸畅通，可取得良好的效果。全身麻醉结合局部麻醉的特点是麻醉见效快，维持时间长。因此具有操作简便，诱导时间短，麻醉进程平稳，麻醉时间长，苏醒快，效果确实等优点，运用得当，对心血管系统和呼吸系统影响较小。4、剖腹产手术的依据剖腹产技术是依据胎盘具有屏障作用，可阻止一些病原微生物侵入，采取无菌剖腹产手术，截断了某些母胎传播疾病的途径，并且可以去除经产道传播的某些细菌和疱疹病毒等病原体，是进行“生物净化”维持种群微生物级别的有效手段，也是提高现有实验动物质量和产量，保证科研成功的有效措施。母猪剖腹产取胎的方法分为子宫摘除法和剖腹取胎法。子宫摘除法施术简单，无菌操作和隔离效果好，手术时细菌污染机会少

11、，容易达到对仔猪的净化要求，能够达到获取清洁级仔猪甚至SPF级仔猪的的目的；从经济的角度来讲，其缺点是施行子宫摘除取胎的方法后，母猪必须淘汰，不能重复利用。采用母猪剖腹取胎法，母猪可再次妊娠、重复利用，但手术操作难度大、麻醉要求高，药物的选择、给药途径等均与手术成功密切相关。止匕外，子宫切开、摘除胎儿、防止细菌污染存在一定难度，在手术过程中要严格无菌,子宫缝合后可能发生子宫内膜炎，导致母猪第二次不孕等问题。5、新生仔猪处置的依据。胎儿抢救是保证仔猪成活的关键。从子宫结扎到取出仔猪的过程应迅速，最好控制在5min以内。取出胎儿，先断脐带，迅速将仔猪口腔、鼻腔的粘液清除，擦干体表并按摩体表，躯体做

12、屈伸运动，必要时进行胸肺复苏和急救操作。为降低对仔猪的刺激和防止仔猪受冻，尽量保持环境或隔离器中的温度保持在37C左右。6、母猪护理采取剖腹取胎法，母猪可再次妊娠、重复利用，因此术后护理就尤为重要。母猪在手术过程中以80m1/h的流速维持耳静脉输入10%葡萄糖注射液，至手术结束。术后母猪的饲养空间应保证母猪做适当活动，防止腹腔脏器发生粘连。连续3天肌注广谱抗生素，以防感染。每日用碘伏消毒创口2次，23周拆除皮肤缝合线。母猪应单独饲养，给予易消化、营养丰富的流质食物，营养与卫生符合GB/T27416的规定。（六）主要试验（或验证）的分析、综述报告，技术经济论证，预期的经济效果；作为猪净化、生产繁

13、育的重要技术手段，目前我国尚无获取SPF猪的剖腹产技术规范。本标准主要是针对获取SPF猪的剖腹产净化技术，参考了SPF猪病原的控制与监测、实验动物动物实验通用要求实验动物动物实验通用要求、医院洁净手术部建筑技术规范等标准，通过妊娠母猪的选择、术前准备、保定与麻醉、剖腹产手术、新生仔猪处置和母猪护理标准关键技术研究，成功建立了获取SPF猪的剖腹产技术，获得进一步净化病原的实验猪。从2017年开始，起草单位对SPF猪剖腹产技术体系摸索与建立、实验实践等方面开展研究，培育出进一步净化病原的实验猪（图1）,为本标准的编制奠定了基础。为了确保技术内容中技术指标的合理性及检测方法的可操作性，起草单位分别进

14、行了验证试验。通过验证试验证明本标准能获得进一步净化病原的实验猪，为技术指标及相应的检测方法的确定提供了证明,为确保本标准的有效实施提供了技术保障。图1剖腹产仔猪照片通过妊娠母猪的选择、术前准备、保定与麻醉、剖腹产手术、新生仔猪处置和母猪护理的描述，提出了获取SPF猪的剖腹产技术规范，完善了SPF猪净化、生产和繁育技术体系，将在很大程度上提升实验猪的质量，从而提高我国动物疫病防控的研究水平，保证畜禽养殖健康发展，也将取得良好的社会和经济效益。（七）采用国际标准和国外先进标准的程度，以及与国际、国外同类标准水平的对比情况，或与测试的国外样品、样机的有关数据对比情况；通过联机检索未查到实验动物猪剖

15、腹产技术规范相关的国家标准、行业标准和国际标准。本标准通过妊娠母猪的选择、术前准备、保定与麻醉、剖腹产手术、新生仔猪处置、母猪护理标准的描述，提出了获取SPF猪的剖腹产技术规范。该标准达到国内领先水平。（A）与有关的现行法律、法规和强制性标准的关系；目前，与动物剖腹产相关的标准为DB63/T794-2009犬剖腹产手术操作技术规范，该文件适用于犬。本文件与我国现行相关法律、法规和强制性标准保持协调一致，没有冲突。（九）重大分歧意见的处理经过和依据；无（十）标准作为强制性标准或推荐性标准的建议；建议作为推荐性标准（十一）贯彻标准的要求和措施建议（包括组织措施、技术措施、过渡办法等内容）;建议由中

16、国实验动物学会实验动物标准化专业委员会组织本标准的宣传、推广和实施监督。（十二）废止现行有关标准的建议；无（十三）其他应予说明的事项。本文件的制定引用了以下文件：GB14925实验动物环境及设施GB/T16551猪瘟诊断技术GB/T18641伪狂犬病诊断方法GB/T27416实验动物机构质量和能力的通用要求GB/T35823实验动物动物实验通用要求GB/T39760实验动物安乐死指南GB50333医院洁净手术部建筑技术规范NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范NY/T679猪繁殖与呼吸综合症免疫酶试验方法NY/T3466实验用猪微生物学等级及监测SN/T1919猪细小病毒病检疫技术规范