医疗器械无菌检验供试品数量、培养基、适用性检查、对照试验.docx

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1、常见的名词解释1 .灭菌：经确认的使产品无存活微生物的过程。目前国际上规定，灭菌过程必须使物品污染微生物存活概率减少到KT及以下。2 .微生物：在显微镜下才能看到的微小实体，包括细菌、真菌、原生动物和病毒。3 .无菌技术：是指在微生物试验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施，其中包括无菌环境设施、无菌检验器材以及无菌操作。4 .无菌操作：是指在无菌环境条件下，在对无菌制品或无菌器械进行检验的过程中，能防止微生物污染与干扰的一种常规操作方法。5 .培养条件：促进微生物复苏、生长和（或）繁殖所采用的生长培养基和培养方法的组合，培养方法可包括温度、时间和其他规定用于培

2、养的条件。6 .需氧微生物：需要氧气进行代谢的微生物。7 .厌氧微生物：不需要氧气进行代谢的微生物。8 .抑细菌/抑霉菌试验：用选定的微生物来演示某些物质的存在能够抑制这些微生物的繁殖。9 .促生长试验：为了证明一种培养基能够支持微生物繁殖而进行的技术操作。10 .假阴性：实际阳性的无菌检验结果被变成了阴性。11 .假阳性：实际阴性的无菌检验结果被变成了阳性。12 .生物指示物：对规定的灭菌过程有特定的抗力，含有活微生物的测试系统。13 .化学指示物：根据暴露于某一灭菌过程所产生的化学或物理变化，显现一个或多个预定过程变量变化的测试系统。14 .无菌保证水平（SA1）：灭菌后产品上存在单个活微

3、生物的概率。15 .表面活性剂：改变溶液表面能（表面张力）的成分。16 .中和剂：有抑菌成分中和能力的化学有效成分。17 .灭活剂：对抑菌成分有灭活能力的化学有效成分。18 .洁净区：需要对环境中尘粒及微生物数量进行控制的房间（区域），其建筑结构、装备及其使用应当能够减少该区域内污染物的引入、产生和滞留。供试品数量的选择检验数量是指一次试验所用供试品最小包装容器的数量。除另有规定外，出厂产品按中国药典2023版四部通则1101中表1规定，上市产品监督检验按表2规定。表1、表2中最少检验数量不包括阳性对照试验的供试品用量。执行GB/T14233系列标准的供试品数量应满足标准中对于检验样品数量的要

4、求。检验量是指供试品每个最小包装接种至每份培养基的最小量。除另有规定外，每份培养基接种的供试品量按中国药典2023版四部通则1101中表3规定。若每支（瓶）供试品的装量按规定足够接种两份培养基，则应分别接种硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆豚液体培养基。采用薄膜过滤法时，只要供试品特性允许，应将所有容器内的全部内容物过滤。表1批出厂产品最少量检验数量供试品批产量N（个）接种每种培养基的最少检验数量注射剂大体积注射剂（100m1）10010050010%或4个（取较多者）10个2股或20个（取较少者）2驰或10个（取较少者）供试品批产量N（个）接种每种培养基的最少检验数量眼用及其他非注射产品2002

5、005%或2个（取较多者）10个桶装无菌固体原料W4450每个容器20%或4个容器（取较多者）2驰或10个容器（取较多者）医疗器械10010050010%或4件（取较多者）10件2的或20件（取较少者）注：若每个容器中的装量不足接种两种培养基，那么表中最少检验数量应增加相应倍数。表2上市抽验样品的最少检验数量供试品供试品最少检验数量（瓶或支）液体制剂10固体制剂10血液制品V50m16V50m12医疗器械10注：1.若每个容器中的装量不足接种两种培养基，那么表中的最少检验数量应加倍增加相应倍数。2.桶装固体原料的最少检验数量为4个包装。表3供试品的最少检验量供试品供试品装量每支样品接入每种培养

6、基的最少量液体制剂VIOOm1全量半量，但不得少于Im120m110%,但不得少于20m1固体制剂M50mg50mgM5g全量半量，但不得少于50mg150mg500mg医疗器械外科用敷料棉花及纱布缝合线、一次性医用材料带导管的一次性医疗器械（如输液袋）其他医疗器械取IOOmg或ICmX3cm整个材料I二分之一内表面积整个器具I（切碎或拆散开）注：如果医疗器械体积过大培养及用量可在200Om1以上，将其完全浸没。培养基的制备培养应注意培养条件：硫乙醇酸盐流体培养基（3035）OCI4天；胰酪大豆腺液体培养基（2025）14天。选择培养条件需考虑的因素：产品的性质、制造方法、潜在的微生物污染来源

7、、可能遇到的微生物种类。硫乙醇酸盐流体培养基必须在煮沸后，再进行分装、灭菌。1 .硫乙醇酸盐流体培养基胰酪豚15.Og,酵母浸出粉5.Og.葡萄糖/无水葡萄糖5. 5g5.Og,氯化钠2.5g,1-胱氨酸0.5g、新配制的0.1%刃天青溶液1O位、硫乙醇酸钠O.5g（或硫乙醇酸0.31）、琼脂O.75g.水IOOOm1除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节PH为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH,使灭菌后在25。C的PH值为7.10.2。分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的12o灭菌。在供试品

8、接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/3,否则，须经IO（TC水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。除另有规定外，硫乙醇酸盐流体培养基置（3035）OC培养。2 .胰酪大豆陈液体培养基胰酪腺17.Og,氯化钠5.0g.大豆木瓜蛋白酶水解物3.0g.磷酸氢二钾2.5g.葡萄糖/无水葡萄糖2.5g2.3g,水1000m1除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，调节PH使灭菌后在25。C的PH值为7.302,加入葡萄糖，分装，灭菌。胰酪大豆腺液体培养基置（2025）OC培养。3.中和或灭活用培养基按上述硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆腺液体培养

9、基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同方法适用性试验。4.0.5%葡萄糖肉汤培养基（用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检验）豚10.Og.氯化钠5.Og,牛肉浸出粉3.Og.葡萄糖5.0g、水IOOOm1o除葡萄糖外，取上述成分混合，微温溶解，调节PH为弱碱性，煮沸，加入葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节PH使灭菌后在25。C的PH值为7.20.2,分装，灭菌。5.胰酪大豆陈琼脂培养基胰酪豚15.Og,氯化钠5.Og,大豆木瓜蛋白酶水解物5.0g、琼脂15.Og,水1000m1o除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节PH使灭菌后在25。C的PH值为7.30

10、2,加入琼脂，加热溶化后，摇匀，分装，灭菌。6 .沙氏葡萄糖液体培养基动物组织胃蛋白酶水解物和胰酪腺等量混合物10.0g、葡萄糖20.0g,水1000Hi1o除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，调节PH使灭菌后在25。C的PH值为5.602,加入葡萄糖，摇匀，分装，灭菌。7 .沙氏葡萄糖琼脂培养基动物组织胃蛋白酶水解物和胰酪腺等量混合物10.0g、琼脂15.0g、葡萄糖40.0g、水IOOOm1o除葡萄糖、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节PH使灭菌后在25。C的PH值为5.60.2,加入琼脂，加热溶化后，再加入葡萄糖，摇匀，分装，灭菌。8 .马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）马铃薯（

11、去皮）200g、琼脂14.0g葡萄糖20.0g,水1000m1o取马铃薯，切成小块，加水IOOOm1,煮沸2030分钟，用68层纱布过滤，取滤液补水至IOOon11,调节PH使灭菌后在25。C的PH值为5.602,加入琼脂，加热溶化后，再加入葡萄糖，摇匀，分装，灭菌。培养基的适用性检查1 .无菌性检查每批培养基一般随机取不少于5支(瓶)，置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。2 .灵敏度检查菌种：培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代(从菌种保存中心获得的干燥菌种为第O代)，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存和确认，以保证试验菌株的生物学特性。所用菌株包括：金黄色葡萄球菌(StaP

12、hy1OCoCCUSaureus)CMCC(B)26003、铜绿假单胞菌(PSeUdoinOnaSaeruginosaCMCC(B)10104k枯草芽抱杆菌(BaCiI1USSUbti1iS)CMCC(B)63501生抱梭菌(C1OStridiumsporogenes)CMCC(B)64941k白色念珠菌Candidaa1bicansCMCC(F)98001.黑曲霉Aspergi11usniger)CMCC(F)98003o3 .菌液制备接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆陈液体培养基中或胰酪大豆脓琼脂培养基上,接种生抱梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，

13、(3035)OC培养1824小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，(2025)培养23天,上述培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白陈缓冲液或O.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度菌悬液。接种黑曲霉至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，(2025)OC培养57天或直到获得丰富的抱子，加入适量含0.05%(m1m1)聚山梨酯80的pH7.O无菌氯化钠-蛋白腺缓冲液或含005%(m1m1)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将抱子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出抱子悬液至无菌试管内，用含0.05%(m1m1)聚山梨酯80的pH7O无菌氯化钠-蛋白

14、脓缓冲液或含0.05%(m1m1)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的抱子悬液。菌悬液若在室温下放置，一般应在2小时内使用，若保存在(2-8)OC可在24小时内使用。黑曲霉抱子悬液可保存在(28),在验证过的贮存期内使用。4 .培养基接种取适宜装量的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种不大于IOOCfU的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生抱梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照；取适宜装量的胰酪大豆脓液体培养基7支，分别接种不大于IOOCfU的枯草芽袍杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照。接种细菌的培养管培养时间不超过3天,接种真菌的培养管培养时间不得超过5天。5

15、.结果判定空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。方法适用性试验1 .菌种及菌液制备金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、生抱梭菌、白色念珠菌、黑曲霉的菌株及菌液制备同培养基灵敏度检查。大肠埃希菌(ESCheriChiaco1DCMCC(B)44102的菌液制备同金黄色葡萄球菌。2 .薄膜过滤法按供试品的无菌检验要求，取每种培养基规定接种的供试品总量，采用薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入不大于IOOCfU的试验菌，过滤。加培养基至滤筒内，接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生抱梭菌的滤筒内加硫乙醇酸盐流体培养基；接种枯草芽泡杆菌、白色念珠菌、黑曲霉的滤筒内加胰酪大豆陈液体培养基。另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。置规定温度培养，培养时间不得超过5天。3 .直接接种法取符合直接接种法培养基用