鸡雌激素E酶联免疫分析试剂盒使用说明书.docx

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1、鸡雌激素（E）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：96T2.Ong/1-60ng/1使用目的：本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中雌激素（E）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡雌激素（E）用纯化的鸡雌激素（E）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入雌激素（E）,再与HRP标记的雌激素（E）抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的雌激素（E）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算

2、样品中鸡雌激素（E）浓度。试剂盒组成130倍浓20m1X1瓶7终止液6m1X1瓶2醐标试剂6m1X1瓶8标准品(120ng/1)0.5m1X1瓶3酶标包被板12孔X8条9标准品稀释液1.5m11瓶4样品稀释液6m1X1瓶10说明书1份5显色剂A液6m11瓶11封板膜2张6显色剂B液6m1X1/瓶12密封袋1个1 标本要2 .标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20保存，但应避免反复冻融3 .不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过（HRP）活性。操作步骤1 .标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试

3、管中进行稀释。60ng/15号标准品150用的原倍标准品加入150用标准品稀释液30ng/14号标准品150闺的5号标准品加入150闺标准品稀释液15ng/13号标准品150田的4号标准品加入150闺标准品稀释液7.5ng/12号标准品150闺的3号标准品加入150闺标准品稀释液3.75ng/11号标准品150Md的2号标准品加入150P1标准品稀释液2 .加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及醐标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样501,待测样品孔中先加样品稀释液401,然后再加待测样品IOH1（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽

4、量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3 .温育：用封板膜封板后37温育30分钟。4 .配液：将30倍浓30倍稀释后备用5 .洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6 .加酶：每孔加入酶标试剂501,空白孔除外。7 .温育：操作同3o8 .洗涤：操作同5。9 .显色：每孔先加入显色剂A501,再加入显色剂B501,轻轻震荡混匀，37C避光显色10分钟.10 .终止：每孔加终止液501,终止反应（此时蓝色立转黄色）。11 .测定：以空白空调零，45Onin波长依序测量各孔的吸光度（0D值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总：准备试剂，样品和

5、标准品加入准备好的样品和标准品，37C反应30分钟:J:洗板5次，加入酶标试剂，37C反应30分钟:JI洗板5次，加入显色液A、B,37C显色10分钟计算计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2 .浓洗涤液可能会有析出，稀释时可在浴中加温助溶，洗涤时不影响。3 .各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4 .请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（Xnx5）。5 .封板膜只限一次性使用，以避免交叉。6 .底物请避光保存。7 .严格按照说明书的操作进行，试验8 .所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9 .本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1 .试剂盒保存：2-8C.2 .有效期：6个月