非蛋白巯基测定试剂盒说明书.docx

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1、非蛋白筑基测定试剂盒说明书微法100T/48S注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。澜定意义：生物体内疏基主要包括非蛋白质疏基和蛋白质疏基。疏基化合物在体内具有重要的解毒功能，对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。渊定原理：疏基基团与5,5。二硫代-双-硝基苯甲酸(DTNB)反应，生成黄色化合物，在412nm处有最大吸收峰。自备实验用品：天平、研钵、恒温水浴锅、酶标仪、96孔板、乙醇和蒸馅水。试剂组成和配制：提取液：液体IoOm1X1瓶，4保存。试剂一：液体18m11瓶，4C保存。试剂二：液体Im1X1管，4C避光保存。样品的制备：1 .按照组织质量(g)：提取液体积(m

2、1)为1510的比例(建议称取约O1g组织，加入Im1提取液)进行冰浴匀浆，然后8000g,4离心Iomirb取上清，置冰上待测。2 .血清，培养液：取0.1m1样本，加入0.4m1提取液，混匀，室温静置IOmin,然后8000g,4离心IOmin,取上清，置冰上待测。操作步I1h1、酶标仪预热30min,调节波长至412nn2、操作表在96孔板中加入如下试剂对照管测定管样品(H1)4040试剂一()150150试剂二(1)10乙醇(1)10混匀，25C静置IOmin,测定412nm吸光值。A=A测定-A对照。每个测定管设一个对照管。计算公式：非蛋白疏基标准曲线：y=18111x-0.0037

3、,R2=I,X为标品浓度，单位mo1m1,y为吸光度AA。1.组织：(I)按样本重量计算非蛋白琉基含量(mo1g鲜重)=(A+0.0037)18111V样总W=0.552(A+0.0037)W(2)按样本蛋白浓度计算非蛋白琉基含量(mo1mgprot)=(A+0.0037)1.8111V样总Cpr=0.552(A+0.0037)Cpr2.血清、培养液：非蛋白疏基含量(mo11)=(A+0.37)1.81115103=2761(AA+0.0037)V样总：加入提取液体积，1m1；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/m1：5：血清，培养液等液体样本稀释倍数;IO3：Immo1/1=103mo1/1注意事项：最低检出限为IoUmOI/1。