铜蓝蛋白CeruloplasminCp测定试剂盒说明书.docx

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1、铜蓝蛋白（CerU1oPIaSmECP）测定试剂盒说明书微量法Ioe）TA8S注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。渊定意义：铜蓝蛋白是血浆的含铜蛋白，有运输铜的功能，同时具有氧化酶的活性，是细胞外液重要的抗氧化剂。渊定原理：铜蓝蛋白催化33,55-四甲基联苯胺生成蓝色产物，在645nm处有特征吸收峰，依此可得铜蓝蛋白活性。自备实唳用品及仪器：天平、可见分光光度计/陶标仪、微量石英比色皿用6孔板和蒸馀水。试剂组成和配制：试剂一：液体Iom1X1瓶，4C保存。试剂二：液体7m11瓶，4C保存。试剂三：液体15m11瓶，4避光保存。（使用前37预热）样本前艇：1、血清（浆）等液体

2、样本：直接检测。2、动植物组织样本：称取约0.1g组织，加入Im1蒸储水，进行冰浴匀浆。10000g,4C离心IOmin,取上清，置冰上待测。渊定操作表：1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至645nm,蒸储水调零。2、操作表空白管测定管样品（H1）3030试剂（H1）9090试剂二（1）60混匀，37C预热5min试剂三（H1）120120混匀，37C反应30min试剂二（1）60混匀，25C室温放置5min,取200H1于微量石英比色叫96孔板中，测定645nm处吸光值。A=A测定A空白。计算公式：a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下1 .按体积计算酶活定义:37C条件下，

3、每分钟每亳升样品与底物作用吸光度升高0.01为一个酶活单位。CP活力（Um1）=AAXV反总0.01V样T=3333AA2 .按鲜重计算单位定义：37条件下，每分钟每克样品与底物作用吸光值升高0.01为一个酶活单位。CP活力（U/g鲜重）=AV反总0.01（WXV样W样总）T=33.33AW3 .按蛋白浓度计算单位定义：37条件下，每分钟每毫克蛋白样品与底物作用吸光值升高0.01为一个酶活单位。CP活力（U/mgprot）=AAXV反总0.01（CPrXV样）T=33.33ACprV样：0.03m1；V反总：0.3m1；T：反应时间，30min：V样总：加入提取液体积，1m1；Cpr：样本蛋白

4、质浓度，mg/m1；W：样本质量，gb.用微汽石英比色皿测定的计算公式如下1、按体积计算酶活定义:37C条件下，每分钟每亳升样品与底物作用吸光度升高0.005为一个酶活单位。CP活力（Um1）=AAXV反总0.005V样+T=66.66xAA2、按鲜重计算单位定义：37条件下，每分钟每克样品与底物作用吸光值升高0.005为一个酶活单位。CP活力（U/g鲜重）=AV反总+0.005（WV样V样总）T=66.66AW3、按蛋白浓度计算单位定义：37e条件下，每分钟每毫克蛋白样品与底物作用吸光值升高0.005为一个酶活单位。CP活力（U/mgprot）=AAXV反总0.005（CPrXV样）T=66.66ACprV样：0.03m1；V反总：0.3m1；T：反应时间，30min；V样总：加入提取液体积，1m1；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/m1：W：样本质量，g注意事项：试剂二和试剂三有一定的毒性和刺激性，请操作时做好防护措施。