液相色谱到底什么时候该手动积分？.docx

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1、液相色谱到底什么时候该手动积分?实验室数据完整性已成FDA检查制药企业的一把利器，其中一条关于随意手动积分或者无书面程序规定手动积分，说明了FDA本身并不是不认可手动积分，而是要求有操作规程规定什么情况可以手动积分？如何积分？并且应保存并记录积分参数。CFDA紧跟FDA的步伐，在2016年度多次飞检中，开具多条数据完整性方面的缺陷，收回多张GMP证书。关于手动积分并没有开具缺陷，制药企业应防患于未然，提前把手动积分管理好。关于手动积分的指南关于手动积分，并没有指南给出明确的定义。笔者只查到有两篇生物样本分析的方法验证指南规定了再积分(Reintegration)的注意事项。FDA的2001年定

2、稿指南Bioana1ytica1MethodVa1idation,及相应的2013年草案指南也有类似的要求。生物样本分析的方法验证2013草案指南，第W.C节“样本数据再积分”规定：SOP应该确定再积分的标准，和怎样进行再积分；应清楚描述、并记录再积分的理由；应报告原始和再积分数据。第VI1D节还规定：再积分数据应有管理人员授权再积分。EMA的2011年指南Guide1ineonbioana1ytica1methodva1idation,第5.5节规定：应该有SOP描述色谱的积分和再积分。应在分析报告中讨论偏离这个SOP的任何偏差。应该记录色谱积分、再积分的积分参数、初始积分数据、最终积分数据

3、，并在要求时立即可得。目前没有关于手动积分的公认的定义，Hi11的一篇文章，讨论了手动再积分的范围和术语，并总结认为，建立一致的定义是有必要的。在2015年11月，美国费城的ISPE年会上，企业人员BobMcDowaII和MarkNewton建议区分手动干预(Manua1Intervention),和手动积分(Manua1Integration),并提出：手动干预：没有手动改变基线，例如：对峰重命名，或调整积分窗口；改变积分参数；手动积分：分析员手动重新划基线。举两个例子说明：例1在色谱峰的保留时间不在预期的时间窗口内，需要手动干预时间窗口，而峰面积不会改变；需要调查保留时间偏离的原因。可能F

4、DA会把这个干预也归为手动积分；但是Bob认为不必归类为手动积分。所以希望监管机构给出明确定义的指南。例2,有IPEM学员单位提议：手动干预、手动积分这两种方式在有些情况下可替代使用的。峰无法识别(或不能正确识别)时可能通过手动积分(重画基线)或调整积分参数解决；峰积分不好时可通过手动积分(重画基线)或调整积分参数解决。什么情况下进行手动积分？1、低分离度或低响应；2、流动相不稳定，基线紊乱，保留时间变化小；3、色谱柱性能：运行过程中，出现异常峰；4、软件积分的局限性，如由于软件参数阈值的设置导致峰未积分，峰起点和终点间出现肩峰和异常的基线漂移，软件错误(峰未积分和错误识别峰)；5、由于样品母

5、体的干扰导致的复杂色谱图：裂峰、目标杂质的同时洗脱/肩峰、基线噪音、负峰、基线上升或下降(由于某些梯度程序)、峰的严重拖尾、烧类的存在导致自动积分不正确。手动积分的检查不合格项在2014年，FDA对欧洲某实验室的检查中，483表格中有一个观察项这样表述：没有描述如何进行手动积分的操作规程(Noprocedureexistsdescribinghowtoperformmanua1integration)0在2007年8月，FDA给1einerHea1thProducts公司的警告信中，有一条缺陷项这样表述：检查员记录了很多“数据捏造(manipu1ationofdata),却没有解释捏造原因”。

6、这个捏造包括：改变色谱积分参数、重新标记峰,这样之前本应该积分的峰就不再积分,不计入杂质的计算。这说明了FDA是接受手动积分的，但应该有操作规程控制手动积分的条件、权限、注意事项等，不能背离科学地通过手动积分使检验结果合格。备注：在FDA的现场检查中，例如发现预进样、重复检验的情况，检查员的观点是：如果企业证明是科学的、必要的，就应该写入操作规程。这也意味着，需要经过充分验证、科学评估。手动积分的用处理想条件下,在通过系统适用性试验后,标准品、样品的色谱应一直以相同的方法进行积分。但是实际情况并非如此，尤其是接近定量限、检测限的情况下，有些峰自动积不上，需要手动积分。手动积分虽然会受主观因素的

7、影响，在科学分析色谱结果时也是需要的。举两个例子说明：例1当出现异常峰，分离度不好的峰时，可以手动强制分割。例2,研发阶段，API、稳定性样品的纯度、降解产物的检验方法色谱运行条件相同，但应考虑到检测分析的重点不同，可能需要不同的积分参数。在这种情况下，最好建立不同的分析方法、程序。手动积分使用的注意事项通常，在得到自动积分色谱图后，分析保留时间、峰型是否如预期，峰是否被正确识别，基线是否满足要求，或者其它标准。只有在色谱图不可接受时，才可考虑是否可以进行手动积分，或者进行实验室调查。有两种情况，是禁止进行手动积分的：在自动积分后，对称的峰有可接受的基线；增强峰、或削减峰的目的是为了满足系统适用性接受标准，或满足放行质量标准。总之，企业应建立科学、合理、透明的自动积分操作规程，并满足数据完整性的要求。在SOP之外进行的手动积分可能被视为数据造假。