麻疹病毒实验活动风险评估报告.docx

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1、麻疹病毒实验活动风险评估报告一、生物学特性(-)种类和病毒分型麻疹病毒(Measlesvirus)是麻疹的病原体，分类上属于副粘病毒科麻疹病毒属。电镜下麻疹病毒呈球状或丝状，直径约120250nm,有包膜，核衣壳呈螺旋对称，核心为单负链RNA,不分节段,基因组全长约16kb,包括N、P、M、F、H、L6个基因，分别编码6个结构和功能蛋白。麻疹病毒的抗原性较稳定，只有一个血清理，但近年来的研究证明，麻疹病毒抗原体也有小的变异。根据麻疹病毒核蛋白基因C末端高变区或全长血凝素基因特点，可以将野生型麻疹病毒分为AH8个基因群，包括23个基因型。(二)来源早在东汉时期，我国张仲景在金匮要略中就有关于麻疹

2、的描述，并认为麻疹是一种传染性很强的疾病。国外在公元10世纪，波斯医生拉兹才开始描述该病，直到1675年才认为麻疹是一种独立的疾病。1864年，贝纳肯定了麻疹是通过呼吸道播散的，是由人传给人的疾病，潜伏期为14d,可获终生免疫。1911年，哥特贝格等用急性期患者的血液及咽拭子感染了猴子，证实了麻疹病原是一种滤过性病毒。1930年，勃来兹应用鸡胚培养麻疹病毒获得成功。1954年,恩多等用人胚肾及人羊膜细胞培养病毒取得成功，为深入研究麻疹奠定了实验室基础。1963年，美国成功地应用了经鸡胚羊膜腔适应和鸡胚单层细胞传代的减毒株制备了疫苗。我国也于1965年自行研制了减毒活疫苗并开始普种，从此，麻疹的

3、发病率和死亡率大幅度降低。（三）传染源人是麻疹病毒的唯一宿主，因此，病人是唯一的传染源。急性期患者为最重要的传染源，无症状带病毒者和隐性感染者较少，传染性也较低。在患者出疹前6d至出疹后3d内均具有传染性，前驱期传染性最强，出疹后逐渐减低，疹消退时已无传染性。传染期患者口、鼻、咽、眼结合膜分泌物均含有病毒，恢复期不带病毒。（四）传播途径主要经呼吸道飞沫传播。病人咳嗽、打喷嚏时，病毒随排出的飞沫经口、咽、鼻部或眼结合膜侵入易感者。密切接触者亦可经污染病毒的手传播，通过第三者或衣物间接传播较为少见。（五）易感性人群普遍易感，易感者接触患者后90%以上会发病，病后可获持久免疫力。6个月内的婴儿因从母

4、体获得抗体，因此，很少患病，该病主要在6个月至5岁小儿间流行。目前，成人麻疹病例的报导越来越多，甚至在局部地区有小的流行。其主要原因为幼时接种过麻疹疫苗，以后未再复种，导致体内抗体的水平降低而使其成为易感者。（六）潜伏期潜伏期为621d,平均为10d左右，接种过麻疹疫苗者可延长至34周。（七）剂量一效应关系目前，尚未见有麻疹病毒对人准确感染剂量的报导，麻疹病毒的感染主要与暴露途径和感染方式相关。（八）致病性因为CD46是麻疹病毒受体，所以，具有CD46的大多数组织细胞均可为麻疹病毒感染的靶细胞。经呼吸道进入的病毒首先与呼吸道上皮细胞受体结合并在其中增殖，再侵入淋巴结增殖，然后入血（在白细胞内增

5、殖良好），形成第一次病毒血症。病毒到达全身淋巴组织后进行大量增殖，再次入血，形成第二次病毒血症。此时，开始发热,以及由于病毒在结膜、鼻咽黏膜和呼吸道黏膜等处增殖而出现的上呼吸道卡他症状。病毒还可在真皮层内增殖，口腔两颊内侧黏膜出现中心灰白、周围红色的Koplik斑。发病3d后，患者可出现米糠样皮疹,皮疹形成的原因主要是局部产生超敏反应。一般患儿皮疹出现24h后，体温开始下降，呼吸道症状一周左右消退，皮疹变暗，有色素沉着。有些年幼体弱的患儿，易并发细菌性感染，如继发性支气管炎、中耳炎，尤其是易患细菌性肺炎，这是麻疹患儿死亡的主要原因。麻疹病毒感染后，大约有0.1%的患者会发生脑脊髓炎，它是一种迟

6、发型超敏反应性疾病，常于病愈1周后发生，呈典型的脱髓鞘病理学改变及明显的淋巴细胞浸润，常留有永久性后遗症，病死率为15%o免-疫缺陷儿童感染麻疹病毒，常无皮疹，但可发生严重致死性麻疹巨细胞肺炎。另外，约百万分之一的麻疹儿童患者在其恢复后若千年，多在学龄期前出现亚急性硬化性全脑炎（Subacutesclerosingpanencephalitis, SSPE）。SSPE 属急性感染的迟发并发症，表现为渐进性大脑衰退，一般12年内死亡。经研究发现，患者血清及脑脊液中虽有高效价的IgG或IgM抗麻疹病毒抗体，但是用这些抗体很难分离出麻疹病毒。现认为，脑组织中的病毒为麻疹缺陷病毒，由于在脑细胞内病毒M

7、基因变异而缺乏合成麻疹病毒M蛋白的能力，从而影响病毒的装配、出芽及释放。因此，将SSPE脑组织细胞与对麻疹病毒敏感细胞（如HeLa. VerO等）共同培养，可分离出麻疹病毒。（九）变异性长期以来，麻疹病毒一直被认为是稳定遗传的病毒，只有一个血清型。但近年来的研究表明，麻疹病毒抗原也存在小幅度的变异。20世纪80年代以来，中国流行的麻疹野病毒与20世纪50-60年代的分离株以及目前广泛使用的疫苗株之间存在不同特性，如无血凝活性、只能被多克隆抗体中和、不能在Vero细胞上复制等。1998年，许文波等人在我国首次发现一个新的基因型别一一H1基因型，也是近年来中国优势流行株，还未见其他国家有H1基因型

8、流行的报导。（十）环境中的稳定性麻疹病毒在外界环境中稳定性较差，对热、紫外线及一般消毒剂敏感，但对寒冷及干燥环境有较强的抵抗力。（H一）药物敏感性目前,对麻疹病毒尚无特效抗病毒药物。（十二）消毒剂敏感性麻疹病毒对一般消毒剂都没有抵抗力，对过氧乙酸、75%乙醇、含氯消毒剂等均敏感。（十三）物理灭活高温、干燥、日晒均很容易将麻疹病毒灭活，置于56或空气流通环境中半小时，麻修病毒就会失去活力。（十四）在宿主体外存活麻疹病毒在体外抵抗力较弱，室温下可存活数天，-70时可存活数年。（十五）与其他生物和环境的交互作用高温环境及紫外线照射下，麻疹病毒均不易存活，而在寒冷及干燥的环境中抵抗力较强。（十六）预防

9、和治疗方案1 .预防措施关键是对易感者接种麻疹疫苗，提高其免疫力。管理传染源对麻疹患者应做到早诊断、早报告、早隔离、早治疗，患者隔离至出疹后5d,伴呼吸道并发症者应延长到出疹后10do易感的接触者检疫3周，并使用被动免疫制剂。流行期间，儿童机构应加强检查，及时发现患者。切断传播途径流行期间应避免去公共场所或人多拥挤处，出入应戴口罩；无并发症的患儿在家中隔离，以降低传播和继发医院感染的风险。保护易感人群关键是主动免疫，主要对象为婴幼儿，但未患过麻疹的儿童和成人均可接种麻疹减毒活疫苗。其次是被动免疫，体弱、妊娠妇女及年幼的易感者接触麻疹病人后，应立即采用被动免疫。在接触病人5d内注射人血丙种球蛋白

10、3mL可预防发病。若5d后注射,则只能减轻症状，免疫有效期为38周。2 .治疗措施对麻疹病毒尚无特效抗病毒药物，目前的主要治疗措施为对症治疗、加强护理、预防和治疗并发症。二、实验室相关活动风险评估与控制（一）实验室感染性因子的种类、来源和危害1 .感染性因子的种类本实验室可能的感染因子为麻疹病毒本身。2 .感染因子的来源用于麻疹病毒抗体检测的血液样本。样本采集与检测过程涉及的所有实验场所。实验室操作中可能产生的含病毒的气溶胶。3 .感染性因子可能造成的危害被污染的实验器材、器皿等对实验室环境造成污染。实验室废弃物对环境造成污染。实验人员暴露后感染。实验室含病毒的气溶胶对实验室环境造成污染。（二

11、）实验室常规活动过程中的风险评估与控制1 .实验方法风险点识别若采用国家标准、行业标准之外的其他未经确认的实验方法，或在使用国家标准、行业标准之前未进行技术确认，操作时可能存在安全风险。风险控制措施尽量采用国家标准、行业标准或经过充分验证的实验方法；在使用新的或变更过的国家标准、行业标准之前，必须经过严格的技术确认。2 .样本采集所用器材一次性采血针、真空采血管、消毒棉签及一次性利器盒。风险点识别采血过程中，工作人员与患者近距离接触，患者咳嗽、打喷嚏时，病毒随飞沫排出，很容易通过口、咽、鼻部及眼结合膜入侵工作人员，此时，风险最大。若操作不规范，则会发生样本滴洒或溅出的情况，产生的气溶胶存在感染

12、操作者的风险。若被麻疹患者的血液污染了破损皮肤、黏膜，或被含有麻疹病毒的血液污染了的针头刺破皮肤，这种情况也不能完全排除被感染的可能。血液标本溅洒出来，对环境造成污染。风险控制措施采血前做好个人防护，穿戴防护服、手套、口罩、护目镜和帽子，最好让患者本人也戴上口罩；用过的针头直接放入利器盒内，禁止用手直接接触使用后的针头或将使用后的针头重新套上针头套；采血管用真空抗凝管，采好血后直立于试管架中，防止倒翻；消毒棉签等污染物放入医疗废弃物专用袋中，统一消毒处理。3 .样本的包装和运输所用器材真空采血管、95千帕样品运输罐、B类标本运输箱（UN3373冷藏箱），及运送车辆。风险点识别若使用不合格包装进

13、行运输，容器密封不严，将不能安全有效地防止运输过程中包装容器意外破损，从而产生污染扩散的可能。风险控制措施严格按照生物安全的要求，采用三层容器包装:第一层采用真空采血管装样本，应密闭防渗漏；第二层采用95千帕样品运输罐，可容纳并保护第一层容器，密封不易破碎、耐压力、防渗漏且易消毒；第三层采用B类标本运输箱，要容纳并保护、固定第二层容器，且易于消毒。样本应由中心专车运回实验室。4 .样本接收风险点识别若运输途中有样本管破裂、血液溢漏的情况，则可能对样本接收人员造成污染。风险控制措施样本直接送至实验室，由专业检验人员接收，接收样本前做好个人防护，穿戴好防护服、手套、口罩和帽子。若有样本管破裂，应立

14、即在生物安全柜内将尚存留的样本移出，废弃物放入带盖的防刺破的塑料罐中，被污染的容器用0.5%过氧乙酸等消毒液浸泡后再清洗。5 .样品检测所用器材离心机、生物安全柜、移液器、洗板机及酶标仪等设备。风险点识别离心过程中离心管破裂产生大量气溶胶，并造成离心机污染。实验操作过程中血液样本溅洒产生气溶胶，并造成人员污染或台面、地面等环境污染。洗板、读板时液体溅出污染设备表面或工作台面。风险控制措施所有检测操作均在BSL-2实验室中进行，检测人员在进行实验前按照二级生物安全防护要求做好个人防护；加样移液操作在生物安全柜内进行，动作轻缓；判读结果时,5标板应轻拿轻放，避免液体溅出；待实验完毕，先消毒手部，再

15、脱去手套并立即洗手；若有意外情况发生，应及时采取有效措施。6 .阳性样本的保存所用器材生物安全柜、移液器、带螺旋盖的塑料管及可密封的塑料冻存盒。风险点识别麻疹阳性样本若保存不当，易造成人员或环境污染。风险控制措施按照二级生物安全防护要求做好个人防护；样本的保留在生物安全柜内进行，动作要轻缓；所有样本的血清或血浆都保留在带螺旋盖的塑料管内，再装入可密封的塑料冻存盒中，置于-20以下的冰箱内保存，实行双人双锁管理。7 .阳性复核样本的上送所用器材带螺旋盖的塑料管、95千帕样品运输罐、B类标本运输箱（UN3373冷藏箱）和运送车辆。风险点识别若包装不符合相应生物安全等级的要求，或运输工具无安全保障，则易造成污染扩散，甚至样本丢失。风险控制措施阳性样本上送应严格执行规范“UN3373 3层包装”（同