胰岛素标准操作程序SOP文件.docx

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1、ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-35胰岛素版序：ABCD页码：第1页，共4页用途：用免疫学方法定量测定人血清或血浆中胰岛素的含量。用于各种糖类代谢紊乱的诊断和治疗，包括糖尿病和低血糖症。电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏Elecsys2010免疫测定分析仪。概述：胰岛素是一分子量约为6000D的激素肽，由胰岛的B细胞分泌，经门静脉和肝脏进入血循环。胰岛素的释放呈波段性，并紧随血糖分泌周期之后，约迟2分钟。胰岛素由二条肽链组成，a-链含21个氨基酸，链含30个氨基酸。胰岛的B细胞先合成单链的前胰岛素原，随后迅速裂解成前胰岛素。特异的蛋白酶再将前胰岛素裂解成胰岛素和C-肽。全部的C

2、-肽和一半的胰岛素即刻被释放进入血流，另一半的胰岛素被储留在肝脏。血循环中的胰岛素半衰期为3-5分钟，主要在肝脏降解。前胰岛素和C-肽主要在肾脏灭活和排泄。胰岛素的氨基酸序列在进化过程中高度保守。因此，在基因工程人胰岛素之前，已成功将猪或牛胰岛素用于糖尿病的治疗。胰岛素的生理作用通过特异的受体传导，主要通过肝脏、脂肪组织和肌肉系统的细胞摄取血糖，这是胰岛素降血糖作用的基础。血清胰岛素检测主要用于针对低血糖患者。可帮助了解葡萄糖/胰岛素比值和有关胰岛素分泌情况，如甲糖宁试验、胰高血糖素试验、口服葡萄糖耐量试验及饥饿激发试验等。尽管胰腺合成胰岛素的量经常是通过测定C-肽来判定，但仍有必要测定胰岛素

3、。例如，治疗剂量的非人源性胰岛素可导致产生抗胰岛素抗体。在这些病例中，检测血清胰岛素的浓度反映了游离的、具有生理活性的胰岛素含量，而C-肽测定反映的是内源性胰岛素分泌的总量。胰岛素代谢紊乱可对许多代谢过程产生重大影响。游离的、具有生理活性的胰岛素含量过低，可导致糖尿病。部分原因可能是B-细胞的破坏（I型糖尿病）、胰岛素活性降低或胰腺合成减少（H型）、循环抗胰岛素抗体、胰岛素释放延迟或胰岛素受体缺乏（不足）。另一方面，自发的、不规则的胰岛素分泌是低血糖的常见原因。这种状况下糖原异生被抑制，可见于严重的肝、肾功能衰竭，胰岛细胞瘤或癌。也有假性低血糖症。糖耐量降低人群中有396的人其代谢状况经一段时

4、间后会恶化成糖尿病。怀孕期间糖耐量降低需要治疗。胎儿死亡危险性的明显升高要求加强监测。Elecsys胰岛素试验采用了二种人胰岛素特异的单克隆抗体。原理：采用双抗体夹心法，整个过程18分钟完成。 第1步：20l标本、生物素化的抗胰岛素单克隆抗体和钉（Ru）标记的抗胰岛素单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-35胰岛素版序：ABCD页码：第2页，共4页 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光

5、，通过光电倍增管进行测定。 检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。试剂:M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6. 5mlo粒子浓度072gl,生物素结合能力470ng生物素/ml粒子。含防腐剂。R1：生物素化的抗胰岛素单克隆抗体（灰盖），1瓶，10M。浓度L0mgl, MES缓冲液005moll, pH6.0o含防腐剂。R2： Ru（bpy）32+标记的抗胰岛素单克隆抗体（黑盖），1瓶，10ml。浓度L75mgl,MES缓冲液0.05oll, pH6.0o含防腐剂。储存和稳定性：存放在2-8度，切莫倒置。未开封，可

6、稳定至标明的保质期。开封后，2 8度12周；放在Elecsys2010上，4周；（室温2 25度；开盖时间累计不超过20小时）。标本米集和准备：血清：按标准常规方法采集。血浆：肝素锂、EDTA-K3或柠檬酸钠抗凝。溶血有干扰，因为红细胞释放可降解胰岛素的肽酶。标本在15 25度可稳定4小时，2 8度可稳定24小时，20度可稳定6个月。只可冻融一次。含沉淀的标本使用前需离心。不要使用加热灭活的标本。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。标本、定标液和质控品在测定前的温度应与室温平衡；放入仪器后应在2小时内测定以避免蒸发的影响。检测步骤：提供的材料：货号：12017547, 100人份的Elecsys胰岛素

7、试剂盒包含: M链霉亲和素包被的微粒 R1生物素化的抗胰岛素抗体 R2三联毗咤钉标记的抗胰岛素抗体ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-35胰岛素版序：ABCD页码：第3页，共4页需要的材料(未提供)： Elecsys胰岛素定标液(CalSet)货号12017504 Elecsys 通用质控品(PreciControl Universal)货号 11731416 Elecsys2010分析仪分析仪 Elecsys系统缓冲液(ProCell)货号 11662988 Elecsys 测量池清洗液(CleanCell)货号 11662970 Elecsys 添加剂液(SysWash)货号

8、11930346 Elecsys 系统清洗液支架(Adapter for SysClean)货号 11933159 Elecsys 2010反应杯(Assay Cup)货号 11706802 Elecsys 2010吸样头(Assay Tip)货号 11706799 Elecsys 系统清洗液(SysClean)货号 11298500方法：按仪器操作说明进行操作。检查试剂与消耗品是否充足。仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的特异性参数，不需手工输入。如果特殊情况下仪器无法阅读条形码，可以手工输入15位数字。将冷藏试剂预温到20度后放置于仪器的试剂盘上，避免产生泡沫。仪器自动控制试剂温度和

9、开/关试剂瓶盖。定标:每批胰岛素试剂有一条形码标签，含有该批试剂定标所需的特殊信息。应用胰岛素CalSet定标液定标。定标频率：每批试剂必须用新鲜试剂(试剂经仪器注册24小时以内)标定一次，如再次标定即根据下列要求： 一个月(同一批号试剂) 7天(放置仪器上的同一试剂盒) 根据要求进行标定：如质控结果超出范围时。质控：Elecsys通用质控品(PreciControl Universal) 1和2或其它合适的质控品。各浓度区域的质控至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。请注意：商用质控品可

10、能含动物来源的胰岛素。分析结果时，应考虑相应的交叉反应。用本试验测定结果如下：ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-35胰岛素版序：ABCD页码：第4页，共4页测定量牛胰岛素猪胰岛素人前胰岛素C肽胰高血糖素生长抑素%交叉反应25.019.20. 05n. d.n. d.n. d.0. 04173608334100010010001006579pmol/1pmol/1gmlng/mlpg/mlpg/mlpmol/1对每一个标本，仪器会自动计算结果,单位是uIUml或pmol/1。换算方法是胰岛素样生长因子I计算：pmol/1 0. 144=UmlU /ml 6. 945=pmollo干

11、扰因素：该方法不受黄疸（胆红素90mgdl）、脂血（脂质1800gdl）和生物素60ngml干扰。溶血会产生干扰。接受高剂量生物素（5mg天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（18900Uml）。20种常用药物经试验对本测定无干扰作用。胰岛素浓度高到20000U /ml也不出现钩状效应。接受过牛、猪或人胰岛素治疗的病人有时会有抗胰岛素抗体，对检测结果会有影响。接受过小鼠单抗治疗或体内诊断的病人可能会出现假阳性反应。偶尔会遇到抗钉抗体的干扰。胰岛素测定结果应结合病人的病史、临床症状和其他检查结果进行诊断。检测范围：0. 200-1000U /ml或L 39-6945 pmol/1稀释：由于检测范围足够宽,标本不需稀释。正常参考值：2. 6-24. 9U /ml或17. 8-173 pmol/1 （范围：第5百分位数一第95百分位数）此参考值由德国一临床中心对57名空腹的健康者测得。如有必要，各实验室应自己测定一个参考值。