游离前列腺特异性抗原free PSA标准操作程序SOP文件.docx

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1、ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-30版序：ABCDfree PSA页码：第1页，共4页概述：(free prostate specific antigen)游离前列腺特异性抗原，是血液中小部分以游离形式存在，未与。1糜蛋白结合的PSA片段。正常人约80%的t-PSA以结合形式存在，f-PSA 约占 20%。PSA仅由前列腺上皮细胞分泌，具有很高的组织特异性，在前列腺癌(ProstateCancer,PCA)患者血清中可明显升高，但对其诊断的特异性并不高，良性前列腺增生(Benign Prostate Hyperplasia,BPH)前列腺息肉、前列腺缺血、细菌性前列腺炎等都可轻

2、度升高。临床应用：文献报告21 %47%的BPH患者t-PSA高于正常，另有15%30%的PCA患者血清t-PSA在正常值以下，t-PSA在PCA和BPH两者间有一临界重迭区域，限制了血清t-PSA作为肿瘤标记物的作用，因此，血清t-PSA不能作为诊断有无恶性前列腺疾病的绝对指标。但同时，f-PSA升高亦并非PCA所特有，单以f-PSA作为对PCA和BPH的鉴别诊断也是相当困难的，其对PCA的诊断缺乏特异性，也不够理想。而以f-PSA/t-PSA比值作为对PCA的诊断指标，在对PCA的诊断敏感度和阴性预测值无显著改变的同时可极显著地提高它的特异性和阳性预测值。据报道，f-PSA/t-PSA比值

3、这一参数能提高诊断特异性20%,研究结果显示，f-PSA/t-PSA比值对PCA诊断的特异性比t-PSA f-PSA分别高出35%和32%。fPSA/PSA比值应用1)健康男性测得的fPSA与tPSA显示的相关系数不大(Y =0.50)。它提示健康男性的表达是相对独立的；2)前列腺良性增生的患者fPSA显著增高；前列腺癌患者的fPSA与tPSA的比值明显降低，采用F/T的比值可以明显提高诊断前列腺癌的敏感性3)采用F/T比值可以作为BPH与PCA的鉴别诊断指标，结合临床症状、DRE、影象学检查，可以提高PSA对PCA诊断特异性，减少不必要的组织活检；ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-0

4、2-30free PSA版序：ABCD页码：第2页，共4页原理：采用双抗体夹心法，整个过程18分钟完成。 第1步：标本、生物素化的抗fPSA单克隆抗体和钉（Ru）标记的抗fPSA单抗混匀，形成夹心复合物。 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。试剂：M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，

5、6. 5mlo含防腐剂。R1：生物素化的抗fPSA单克隆抗体（灰盖），1瓶，10ml。含防腐剂。R2： Ru（bpy）32 +标记的抗fPSA单克隆抗体（黑盖），1瓶，10ml。含防腐剂。储存和稳定性：存放在2-8度，切莫倒置。未开封，可稳定至标明的保质期。开封后，2-8度，12周；放在Elecsys2010, 8周；（室温20 25度；开盖时间累计不超过20小时）。标本采集和准备：血清：按标准常规方法采集。血浆：EDTA-K3或柠檬酸钠抗凝。（不要使用肝素抗凝血浆或草酸盐/氟化物抗凝血浆。确保标本不被肝素污染。）标本在28度可稳定24小时，-20度可稳定12个月。只可冻融一次。含沉淀的标本使

6、用前需离心。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。标本、定标液和质控品在测定前的温度应与室温平衡；放入仪器后应在2小时内测定以避免蒸发的影响。检测步骤：提供的材料：货号：100人份的Elecsys F-PSA试剂盒包含： M链霉亲和素包被的微粒 R1生物素化的抗f-PSA抗体 R2三联毗咤钉标记的抗f-PSA抗体ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-30free PSA版序：ABCD页码：第3页，共4页需要的材料(未提供)： Elecsysf-PSA定标液(CalSet) ElecsysfPSA质控品(PreciControl Cardiac) Elecsys通用稀释液 Elecsys2010

7、 分析仪 Elecsys系统缓冲液(ProCell) Elecsys 测量池清洗液(CleanCell) Elecsys 添加剂液(SysWash) Elecsys 系统清洗液支架(Adapter for SysClean) Elecsys 2010反应杯(Assay Cup) Elecsys 2010吸样头(Assay Tip)方法：按仪器操作说明进行操作。检查试剂与消耗品是否充足。仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的特异性参数，不需手工输入。如果特殊情况下仪器无法阅读条阅读条形码，可以手工输入15位数字。将冷臧试剂预温到20度后放置于仪器的试剂盘上，避免产生泡沫。仪器自动控制试剂温度

8、和开/关试剂瓶盖。定标:每批fPSA试剂有一条形码标签，含有该批试剂定标所需的特殊信息。应用CalSet定标液定标。定标频率：每批试剂必须用新鲜试剂(试剂经仪器注册24小时以内)标定一次，如再次标定即根据下列要求： 一个月(同一批号试剂) 7天(放置仪器上的同一试剂盒) 根据要求进行标定：如质控结果超出范围时。质控：Elecsys f-PSA质控品(PreciControlCardiac) 1和2或其它合适的质控品。各浓度区域的质控至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。计算：对每一个标本，

9、仪器会自动计算结果，单位是ng/ml或mg/L。ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-30free PSA版序：ABCD页码：第4页，共4页干扰因素：该方法不受黄疸（胆红素27mgdl）、溶血（血红蛋白l.lgdl）、脂血（脂质1500gdl）和生物素50ngl干扰。接受高剂量生物素（5g天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（2000Uml） o 50种常用药物经试验对本测定无干扰作用。接受过小鼠单抗治疗或体内诊断的病人会出现假阳性反应。F-PSA测定结果应结合病人的病史、临床症状和其他检查结果进行诊断。检测范围：稀释：高于检测范围的标本可用

10、通用稀释液稀释。如用手工稀释，结果应乘上稀释倍数。如果是机器自动稀释，机器会自动计算结果。 正常参考范围（Roche Elecsys系统）：(单位:ng/ml)PSA2-202-20specificity63%82%cut-off (free/total)sensitivity0.2390%0. 1982%建议各实验室建立自己的正常参考范围注意事项造成PSA检测假阳性。如果已经行DRE检查,必须使用同一种方法学器/试剂）混合使用。由于直肠指检（DRE）会造成前列腺管上皮细胞挤压或破坏时，导致PSA增高,因此进行PSA检测时必须在直肠指检前抽取血液样本。则需等1周后再检测PSA。（仪器/试剂）测定Free PSA和PSA,避免几种方法学（仪