杂合性缺失、纯合性缺失、点突变的原理与检测方法.docx

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1、杂合性缺失、纯合性缺失、点突变的原理与检测方法缺失，就是基因缺失，简洁地说是没有了，实际上是不能表达某一蛋白了，或者干脆少了这一个位置。杂合性缺失：实际就是杂合子，一对染色体上某一个染色体上基因缺失，与之配对的染色体上仍旧存在。纯合性缺失：实际就是纯合子，一对染色体上两个基因都缺失。依据这个基因的特点，表现出来的外形完全不同，比如人类一些疾病就是这样，假如这个缺失基因是隐性基因，杂合子或杂合性缺失会表现出来缺失。实际上这个基因不能连续表达。由于隐性基因只能在纯合子中表现（个别例外，如性染色体）。假如这个基因是显性基因，那么这种缺失可能不表现出来。由于显性基因不仅在纯合子中表现，在杂合子也表现。

2、详细应用过程，杂合子可以通过回交等方式，获得纯合子。一般来说，对于一个确定的基因要检测在某种病中的突变状况，方法比较成熟，PCR-测序、PCR-SSCP. PCR-RFLP等。假如样本量较少且你所讨论的目的基因较小，采纳PCR或RT-PCR的方法获得目的片段后直接测序是很可行的方法（目前测序一个反应只有不到60元人民币）；但假如样本量较大且所讨论的目的基因较大的话，直接测序可能费用较高，一般可采纳PCR-SSCPPCR-RFLPo不管采纳哪种方法检测基因的点突变都涉及到PCR扩增目的片段，因而涉及到引物设计，引物设计由你的讨论材料、讨论方法、目的基因等打算：假如你能得到患者的病灶部位组织材料的

3、话（从这些材料中提取RNA）,可依据基因的cDNA序列设计引物（假如目的基因太大，则需要设计多条引物；假如采纳PCR-SSCP的方法检测突变，则需要每200bp左右设计一对引物）;假如你只能获得患者的血样的话，就从血样中提取基因组DNA,检测基因突变时，必需每个外显子设计一对引物，对于较大的外显子，还需设计多条引物，当然假如采纳PCR-SSCP的方法检测突变，同样需要在基因的外显子上每200bp左右设计一对引物。假如你想检测外显子内含子之间的剪接位点突变，可依据目的基因所在的基因组序列设计引物。对于缺失（杂合缺失或纯合缺失）的检测方法，一般来说，就是PCR或RT-PCR,然后进行一般的琼脂糖凝

4、胶电泳即可。首先依据缺失部位两侧设计一对引物，然后以基因组DNA或RNA为模板，进行PCR或RT-PCR扩增，一般的琼脂糖凝胶电泳后，可通过扩增产物及大小直接推断：只得到一条扩增产物且扩增产物与目的片段大小全都的患者，为不存在此部位缺失的患者；只得到一条扩增产物且扩增产物较小的患者，即为纯合缺失；有2条扩增产物，一条与野生型大小相同，另一条与缺失的相同，即为杂合缺失。关于杂合性缺失的检测vitzj:检测杂合性缺失通常用定量荧光检测str不同重复次数的峰值.假如两个峰值之前的比例是1:1,说明一对等位基因都存在，未缺失；假如比值不是1:1,且差别比较大，说明可能有杂合性缺失；假如只有一个峰，有两

5、种可能：1 .正常基因组是有两个峰的，那么有缺失.2 .正常基因组只有一个重合峰，则看标本的峰是不是将近两倍高，假如是说明是正常，假如峰值比较低，不到两倍，那有可能是缺失,但这样推断不精确，通常需要换一个位点再看.vitzj:纯合性缺失,就是染色体上的一对等位基因一起缺失；杂合性缺失，顾名思义就是只丢失了一条同源染色体上的基因，另一条还在，通常假如另一条上的基因突变或者甲基化了就使基因彻底不能表达,假如发生在抑癌基因上就可能导致肿瘤.检测方法有FISH, str,和snpfish就不多说了，结果推断简洁明白，但贵，而且操作难度大.str一对同源染色体上同一 str位点的重复次数不肯定相同，pe

6、r扩增str全长，再跑胶,假如消失两条带，就说明该str位点是杂合子,假如你在肿瘤细胞中只看到一条带，那说明有杂合性缺失发生了.但假如该位点原来就是纯合子，那该位点被认为是信息不够丰富，需要结合其他位点来看，所以做str需要多个位点.从上面分析可以知道,假如没有正常DNA做对比，就算你跑出来全都是单峰，也不能说明问题，万一他就是个全纯合子呢？以上说得是跑page胶的方法，用测序仪做会简洁些，但原理一样的.结果推断上面的帖子讲了.snp原理也类似，不多说了自己的电脑不在身边，只能也许相关地推举你看看.Genome-Wide Genetic Characterization of Bladder

7、Cancer: A Comparison ofHigh-Density Single-Nucleotide Polymorphism Arrays and PCR-basedMicrosate I Iite Ana lysis这篇文章讲到了检测杂合性缺失比较常用的方法snp和str做snp可能需要MGB探针,会贵些，做str假如你有测序仪就比较便利,假如没有的话就per再跑page胶,麻烦但很廉价纯合性缺失,就是染色体上的一对等位基因一起缺失；杂合性缺失，顾名思义就是只丢失了一条同源染色体上的基因，另一条还在，通常假如另一条上的基因突变或者甲基化了就使基因彻底不能表达,假如发生在抑癌基因上就可能导致肿瘤.这个说法不太精确吧，杂合性丢失，是vitzj所说的丢失了一条，一对抑癌基因丢失了其中之一，变成了杂合子，这是第一次突变，一般发生在诞生前，后来再发生其次次突变时，就是杂合子变成了纯合子，也就是杂合性缺失，抑癌基因缺失，与肿瘤的发生相关。指肿瘤基因组中特定染色体上的某种DNA多态标记的等位基因片段，由同一患者正常组织基因组的两种变成一种，即等位基因型由杂合子变成纯合子.而不是丢失了一条同源染色体的基因。其实这个也就是肿瘤发生学中的“二次突变学说”