高效液相色谱法测定中药升麻中阿魏酸和异阿魏酸的含量.docx

《高效液相色谱法测定中药升麻中阿魏酸和异阿魏酸的含量.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《高效液相色谱法测定中药升麻中阿魏酸和异阿魏酸的含量.docx（3页珍藏版）》请在第一文库网上搜索。

1、高效液相色谱法测定中药升麻中阿魏酸和异阿魏酸的含量目的：测定中药升麻中阿魏酸和异阿魏酸的含量。方法：反相高效液相色谱法。Hypersi1ODS分析柱(250mm4.6mm,5m),流动相：甲醇-水-磷酸(50：150：0.1),紫外检测波长：320nm,灵敏度:1OAUFS,柱温：24,流速：1m1min1o结果:阿魏酸在0.0422.10g(r=0.9993),异阿魏酸在0.0432.14g(r=0.9994)范围内呈线性，阿魏酸和异阿魏酸平均回收率(吁5)分别为98.76%(RSD=16%)和98.32%(RSD=18%)。结论：本方法简便、精确、可靠。关键词升麻兴安升麻大三叶升麻阿魏酸异

2、阿魏酸高效液相色谱法升麻为常用中药，中国药典(1995年版)收载升麻为毛食科升麻属植物升麻(Cimicifugafoetida1.)、兴安升麻(C.dahuricaMaxim.)、大三叶升麻(Cherac1eifo1iaKom.)3种，以根茎入药，具有发表透疹、清热解毒、升举阳气的功能。升麻主要含有机酸类、吠喃色原酮类和三菇类等成分。文献及作者自己进行的药理实验均证明阿魏酸、异阿魏酸是升麻的主要活性成分。有关升麻中阿魏酸和异阿魏酸的含量测定有分光光度法、薄层扫描法，未见用高效液相色谱法测定。本文对药典收载升麻3种植物14个不同产地的样品，进行了阿魏酸和异阿魏酸的含量测定。1仪与试药美国Wate

3、rS公司高效液相色谱仪，包括WaterS600Contro11er型泵，WatersN486型紫外检测器,Waters2010数据处理机。HQQoo5型超声波仪(无锡超声电子设备厂)。阿魏酸由中国药品生物制品检定所提供，高效液相色谱法测定纯度为99机异阿魏酸由本所化学室提取分离，高效液相色谱法测定纯度为98.5机升麻样品分别从四川、陕西、云南、北京、河北、吉林、山西采集或购得，经作者鉴定学名。甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，水为重蒸水。2色谱条件流动相：甲醇-水-磷酸(50：150：0.1)；紫外检测波长：320nm；灵敏度：1.0AUFS；柱温：24；流速：Im1mir?；色谱柱：HyPerSi

4、1ODS分析柱(250mm4.6mm,5Um)O3实验条件考察3.1 提取方法的选择选择四川灌县产升麻粉碎后，分别用甲醇超声波提取1次、提取2次和甲醇加热回流提取1次3种方法进行样品溶液制备。结果表明，超声波提取1次和提取2次阿魏酸和异阿魏酸的含量没有明显差异，而加热回流提取较超声波提取有明显的差异，见表1。故本文选择甲醇加热回流提取的方法。不同提取方法提取时间Zmin阿魏酸含量量异阿魏酸含量/%超声波提取1次400.01760.0805超声波提取2次40+300.01810.0812加热回流提取1次600.04150.10053.2 稳定性试验3 .2.1对照品溶液稳定性取阿魏酸和异阿魏酸混

5、合对照品溶液，在0,1,2,3,4,5,6,7,10h进样测定，结果在06h内，阿魏酸和异阿魏酸峰面积基本稳定，其RSD分别为1.5%和1.8%,n=7,6h后，阿魏酸和异阿魏酸逐渐开始分解，在色谱图上出现2个吸收峰。4 .2.2样品溶液稳定性取样品溶液在0,12,3,4,5,6,7,10h分别进样，结果与对照品相似，在06h内，阿魏酸和异阿魏酸峰面积基本不变，其RSD分别为1.3%和16乐n=7o3.3 重复性试验取同一样品5份，接样品测定方法提取并测定。阿魏酸和异阿魏酸含量的RSD分别为0.23%和0.41%03.4 线性关系考察精密称取干燥的对照品阿魏酸2.1Omg、异阿魏酸2.14mg

6、,用甲醇配制成1m1溶液，即分别为2.10mg血？及2.14Ingm1T溶液，再分别取两液2,5,10,20,30,40,50,80,100H1混合，用甲醇稀释成1m1溶液。按上述分析条件，进样10U1,以对照品量(Ug)对峰面积作图，阿魏酸在0.0422.10Ug,异阿魏酸在0.0432.14Hg范围内，其回归方程分别为：Y=5.64106X-2.33IO5r=0.9993Y=5.17106X+2.12IO5r=0.99943.5回收率试验精密称取已知含量的生药样品0.5g共5份,分别加入2.10Ingm1阿魏酸和2.14mgm1/异阿魏酸对照品溶液各100U1,待溶剂挥干后，按样品测定方法

7、提取并测定。取5次测定的平均值计算回收率(n=5),结果阿魏酸和异阿魏酸回收率分别为98.76%(RSD为1.6酚和异阿魏酸98.32%(RSD为1.8%)o$page$4样品测定4.1 样品溶液的制备将样品粉碎，过40目筛，精密称取0.5g,加入甲醇30m1,加热回流提取1h,过滤，残留物再分别用甲醇1011洗涤2次，合并提取液，蒸干，用甲醇定容于10ITI1容量瓶，对于个别含量不在线性范围的样品，可进行适当的浓缩或稀释。4.2 测定结果用上述分析条件测定，分别精密量取样品溶液和5.3Ugn11，阿魏酸5.1gm1?异阿魏酸的对照品混合溶液各101进样测定5讨论5.1 对阿魏酸和异阿魏酸对照

8、品溶液在190400nm波长范围内进行紫外光谱扫描，阿魏酸和异阿魏酸最大吸收波长分别为313和320nm,因320nm处灵敏度较高，故选择320nm作为检测波长。5.2 由于阿魏酸和异阿魏酸为同分异构体，色谱行为很相似，我们比较了甲醇-水-冰乙酸（20：80：1,30：70：1,35：65：1）,甲醇-水-磷酸（50：50：0.1,40：60:0.1,30：70：0.1,50:150:0.1）及乙睛水一冰乙酸（25：75:1）等，结果发现以甲醇-水-磷酸（50：150:0.1）被测物分离最好。故选择其为流动相5.3 对于样品溶液的制作，我们比较了2种方法，一种是样品用甲醇加热回流提取后，过滤，

9、直接定容；另一种是样品用甲醇加热回流提取后，过滤，浓缩至干，残渣用1%碳酸氢钠溶液溶解，离心，取上清液后，残渣再加碳酸氢钠溶液重复提取1次，合并上清液，用5%盐酸酸化pH34后，氯仿萃取3次，合并氯仿液，浓缩至干，甲醇定容。结果表明样品经酸碱处理后，样品干净，分离度好，但由于处理步骤较多，被测组分损失较大。故本文选择甲醇提取后直接定容制作样品溶液的方法。5.4 对照品阿魏酸和异阿魏酸及样品配成溶液后，不稳定，容易分解，应放棕色瓶避光保存，而且须当天配制。5.5 阿魏酸在植物界分布较广，而异阿魏酸分布较少，阿魏酸和异阿魏酸同时存在的植物更少。从表2分析结果可以看出升麻、兴安升麻、大三叶升麻3种植

10、物均含阿魏酸和异阿魏酸，所以用本方法所得的高效液相色谱图阿魏酸和异阿魏酸的有无，可以作为升麻的定性鉴别依据之一。5.6 阿魏酸和异阿魏酸是升麻主要活性成分之一，其含量高低对于评价升麻的质量具有重要的意义。潘瑞乐（中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所北京IOOO94)陈迪华（中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所北京IOoo94)沈连刚（中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所北京IOOO94)斯建勇（中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所胡子朗（陕西安康志朗生物资源应用研究所安康725000）朱朝德（陕西安康志朗生物资源应用研究所安康725000）北京IOOO94)参考文献1,徐国均，徐珞珊.常用中药材品种整理和质量研究（第一册）.第一版.福建科学技术出版社，1994.530得利特北京科技有限公司网址：