显微镜的使用和革兰氏染色法.docx
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1、一般光学显微镜的使用及革兰氏染色法摘要:微生物的最显著特征就是个体微小,一般必需借助显微镜才能观看到它们的个体形态和细胞结构。熟识显微镜和把握其操作技术是讨论微生物不行缺少的手段。革兰氏染色法是细菌学中重要的鉴别染色法,可以区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。本试验只要是学习并把握油镜的使用及革兰氏染色的方法和步骤,巩固平板划线分别法及无菌操作技术。关键词:显微镜油镜革兰氏染色法1前言L1试验目的1 .学习并把握一般光学显微镜及油镜的原理和使用方法。2 .把握采用显微镜观看不同微生物的基本技能,了解球菌、杆菌等在光学显微镜下的基本形态特征。3 .学习细菌染色的原理和方法。4 .把握细菌的简洁染色法
2、和革兰氏染色法。5 .巩固平板划线分别法及无菌操作技术。1. 2试验原理1. 2.1显微镜的使用在一般显微镜(图1)通常配置的几种物镜中,油镜的放大倍数最大,对微生物讨论最为重要,与其它物镜相比,油镜的使用方法比较特别,需要在载玻片和物镜间加滴镜油(通常用香柏油),这主要有以下两方面的缘由:增加照光明度从承载标本的玻片透过来的光线,因介质密度不同,有些光线会因折射或全反射不能进入镜头,致使摄入光线较少,物象显现不清。所以为了不使通过的光线有所损失,在使用油镜时必需在油镜和玻片之间加入与玻璃的折射率(n=L55)相仿的镜油(通常用香柏油,其折射率n=1.52).光线通过载玻片可直接通过香柏油进入
3、物镜而几乎不发生折射(接物镜油浸系),使视野增加进光量,这样就能使物像更加清楚。详见图2增加显微镜的辨别率图1图21.2.2革兰氏染色法简洁染色法是采用单一染料对细菌进行染色的一种方法。此法操作简便,适用于菌体一般外形和细菌排列的观看。革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C. Gram所创立的。革兰氏染色法可将全部的细菌区分为革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类,是细菌学上最常用的鉴别染色法。革兰氏染色法的基本步骤是:先用初染剂结晶紫进行初染,再用碘液媒染,然后用乙醇(或丙酮)脱色,最终用复染剂(如番红)复染。经此方法染色后,细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌;假如细胞中初
4、染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红色),该菌属于革兰氏阴性菌。该染色法所以能将细菌分为G+菌和G-菌,是由这两类菌的细胞壁结构和组成的差异所打算的。G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质,而且肽聚糖层较薄、交联度低,故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质,增加了细胞壁的通透性,使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出,结果细菌就被脱色,再经番红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高,类脂质含量少,经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小,通透性降低,因此细菌仍保留初染时的颜色2材料与方法2.1 材料2.1.1 菌种大肠杆菌牛肉膏蛋白陈琼脂斜面培育物,金黄色葡萄球菌牛肉膏蛋白陈琼脂
5、斜面培育物,枯草杆菌牛肉膏蛋白陈琼脂斜面培育物。2.1. 2溶液和试剂香柏油,二甲苯,革兰氏染液,草酸镀结晶紫染液,卢戈式碘液,95%乙醇,番红复染液等。2.1.3仪器和其他用品酒精灯,载玻片,一般光学显微镜,擦镜纸,接种环,试管架,镣子,载玻片夹子,载玻片支架,滤纸,滴管和无菌生理盐水等。2. 2方法与步骤简洁染色试验步骤步骤内容备注1涂片:取一块载玻片,滴一滴储水于波片中心,用接种环以无菌操作从大肠杆菌斜面上挑取少许菌苔于水滴中,混匀并涂成薄膜。载玻片要洁净无油迹;滴蒸储水和取菌不宜过多;涂片要涂匀称,不宜过厚。2干燥:在酒精灯火焰上方文火烘干。不要离得太近,以免杀死细菌。3固定:手执玻片
6、一端,让菌膜朝上,通过火焰23次固定(以不烫手为宜)。目的是使细胞质凝固,以固定细胞形态,并使之坚固附着在载玻片上。4染色:滴加一滴结晶紫染液于涂片上,染色1.5分钟。染液刚好掩盖涂片薄膜为宜5水洗:用水洗去涂片上的染色液。不要直接冲洗涂面,而应使水从载玻片的一端流下。水流不宜过急。6干燥:将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。7镜检:详细步骤见2. 2. 2。涂片必需完全干燥后才能用油镜观看。2. 2. 2显微镜的操作步骤步骤内容1显微镜的安置:置显微镜于平整的试验台上,镜座距试验台边缘约10cm,。镜检时态度要端正。2调整光源:将聚光器提升至最高位置,同时通过调整光源灯的电压获得适当的
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